發(fā)布時(shí)間：2021-10-12 17:54

　　背景:如何增強(qiáng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖活性使其移植后發(fā)揮應(yīng)有的療效是目前急需解決的問(wèn)題。目的:探討體外負(fù)壓培養(yǎng)技術(shù)對(duì)小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖活性及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子分泌水平的影響。方法:取第3代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,給予間歇性負(fù)壓培養(yǎng)（-6.65,-13.3,-26.6 kPa）,2 h/次,1次/12 h,對(duì)照組在正常條件下培養(yǎng)。培養(yǎng)12,24,36,48,60 h,采用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況,ELISA檢測(cè)細(xì)胞分泌血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平,RT-PCR檢測(cè)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體mRNA表達(dá)。根據(jù)上述結(jié)果,選擇一個(gè)最佳負(fù)壓條件和時(shí)間（-26.6 kPa,24 h）,將骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分為正常對(duì)照組、負(fù)壓組、負(fù)壓+血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體抑制劑Axitinib組,CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況,EDU試劑盒檢測(cè)EDU細(xì)胞陽(yáng)性率,結(jié)晶紫染色觀察細(xì)胞集落形成單位。結(jié)果與結(jié)論:①與對(duì)照組比較,3個(gè)負(fù)壓干預(yù)組骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞顯著增殖（P<0.05）;②與對(duì)照組比較,3個(gè)負(fù)壓干預(yù)組細(xì)胞分泌血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平顯著增高（P<0.05）,血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體mRNA表達(dá)顯著增高（P<0.05）;③... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)組織工程研究. 2020,24(01)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【部分圖文】：

圖注：圖中A為原代細(xì)胞培養(yǎng)第7天；B為第1代細(xì)胞培養(yǎng)12h；C為第3代細(xì)胞培養(yǎng)第3天；D為第3代細(xì)胞成骨誘導(dǎo)21d茜素紅染色圖1倒置顯微鏡觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)(×100)Figure1Morphologicalobservationofbonemarrowmesenchymalstemcellsunderinvertedmicroscope(×100)

圖注：圖中A為原代細(xì)胞培養(yǎng)第7天；B為第1代細(xì)胞培養(yǎng)12h；C為第3代細(xì)胞培養(yǎng)第3天；D為第3代細(xì)胞成骨誘導(dǎo)21d茜素紅染色圖1倒置顯微鏡觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)(×100)Figure1Morphologicalobservationofbonemarrowmesenchymalstemcellsunderinvertedmicroscope(×100)0h12h24h36h48h60h1.51.20.90.60.30空白對(duì)照組-6.65kPa組-13.3kPa組-26.6kPa組吸光度值圖2負(fù)壓干預(yù)后各組骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖情況Figure2Proliferationofbonemarrowmesenchymalstemcellsineachgroupafternegativepressureintervention圖注：圖中A為負(fù)壓干預(yù)后各組骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)上清液中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子分泌水平；B為負(fù)壓干預(yù)后各組骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體mRNA表達(dá)。與對(duì)照組比較，aP<0.05；與-6.65kPa組比較，bP<0.05；與-13.3kPa組比較，cP<0.05圖3負(fù)壓干預(yù)后各組骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體mRNA表達(dá)Figure3Expressionofvascularendothelialgrowthfactoranditsreceptorinbonemarrowmesenchymalstemcellsundernegativepressure020040060080010001.51.00.50吸光度值(450nm)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平(ng/L)圖4各組負(fù)壓培養(yǎng)后骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分泌血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平與其增殖的線性關(guān)系Figure4Linearrelationshipbetweenthelevelofvascularendothelialgrowthfactorsecretedbybonemarrowmesenchymalstemcellsandtheirproliferationundernegativepressure對(duì)照組負(fù)壓組

生長(zhǎng)因子分泌水平；B為負(fù)壓干預(yù)后各組骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體mRNA表達(dá)。與對(duì)照組比較，aP<0.05；與-6.65kPa組比較，bP<0.05；與-13.3kPa組比較，cP<0.05圖3負(fù)壓干預(yù)后各組骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體mRNA表達(dá)Figure3Expressionofvascularendothelialgrowthfactoranditsreceptorinbonemarrowmesenchymalstemcellsundernegativepressure020040060080010001.51.00.50吸光度值(450nm)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平(ng/L)圖4各組負(fù)壓培養(yǎng)后骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分泌血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平與其增殖的線性關(guān)系Figure4Linearrelationshipbetweenthelevelofvascularendothelialgrowthfactorsecretedbybonemarrowmesenchymalstemcellsandtheirproliferationundernegativepressure對(duì)照組負(fù)壓組負(fù)壓+Axitinib組50403020100吸光度值(450nm)EDUDAPIMerge對(duì)照組負(fù)壓組負(fù)壓+Axitinib組1.51.00.50EDU陽(yáng)性細(xì)胞率(%)P<0.05P<0.05P<0.05P<0.05對(duì)照組負(fù)壓組負(fù)壓+Axitinib組ABC圖注：圖中A為各組骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖情況；B，C為各組EDU細(xì)胞陽(yáng)性率和EDU標(biāo)記情況(×100)圖5血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體抑制劑Axitinib干預(yù)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在負(fù)壓下培養(yǎng)后的細(xì)胞增殖以及EDU標(biāo)記情況Figure5ProliferationandEDU-positivecellsofAxitinib-intervenedbonemarrowmesenchymalstemcellsundernegativepressure12h24h36h48h60h10008006004002000空白對(duì)照組-6.65kPa組-13.3kPa組-26.6kPa組血管內(nèi)皮生

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Rational use of mesenchymal stem cells in the treatment of autism spectrum disorders[J]. Qiang Liu,Mo-Xian Chen,Lin Sun,Chloe U Wallis,Jian-Song Zhou,Li-Juan Ao,Qi Li,Pak C Sham.  World Journal of Stem Cells. 2019(02)
[2]血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子165轉(zhuǎn)染可促進(jìn)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞增殖[J]. 傘光,宋佳.  中國(guó)組織工程研究. 2015(36)
[3]血管內(nèi)皮前體細(xì)胞通過(guò)旁分泌功能促進(jìn)間充質(zhì)細(xì)胞成骨分化[J]. 張猛,張宏偉,馮文磊,王艷杰,印雙紅,陳雪玲,吳向未.  中華醫(yī)學(xué)雜志. 2015 (16)
[4]改良差時(shí)貼壁法分離培養(yǎng)鑒定小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和內(nèi)皮前體細(xì)胞[J]. 馮文磊,張猛,印雙紅,徐芳潔,王艷杰,陳雪玲,吳向未.  解剖學(xué)報(bào). 2015(02)
[5]封閉負(fù)壓引流促進(jìn)豬腹部爆炸傷創(chuàng)面愈合的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 師俊莉,席文錦,易成剛,王志軍,郭樹(shù)鐘,韓巖.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2014(03)
[6]負(fù)壓培養(yǎng)對(duì)大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞增殖及分化的影響[J]. 陶圣祥,余國(guó)榮,喻愛(ài)喜,鄭曉暉,鄧凱.  醫(yī)學(xué)新知雜志. 2007(06)



本文編號(hào)：3433041