目的:構(gòu)建破骨細(xì)胞特異性Trio基因敲除小鼠模型,探究Trio在骨改建過(guò)程中對(duì)破骨細(xì)胞的影響。方法:應(yīng)用creloxp系統(tǒng)培育破骨細(xì)胞特異性Trio基因敲除小鼠,Micro-CT掃描小鼠股骨,股骨組織切片采用HE染色、抗酒石酸酸性磷酸酶染色觀察成骨細(xì)胞及破骨細(xì)胞數(shù)量。使用核因子（nuclear factor,NF）-κB受體活化因子配體及巨噬細(xì)胞集落刺激因子誘導(dǎo)小鼠骨髓細(xì)胞分化為破骨細(xì)胞,觀測(cè)Trio對(duì)破骨細(xì)胞形成的影響。結(jié)果:Trio基因敲除小鼠的體型小,Micro-CT顯示骨密度及相關(guān)參數(shù)升高。組織學(xué)染色表明基因敲除小鼠股骨的骨量增加,破骨細(xì)胞變少。體外實(shí)驗(yàn)中,Trio基因敲除小鼠骨髓細(xì)胞誘導(dǎo)分化的破骨細(xì)胞數(shù)量減少。結(jié)論:成功構(gòu)建破骨細(xì)胞特異性Trio基因敲除小鼠模型,Trio敲除后,小鼠骨量增加,破骨細(xì)胞的分化受到抑制。 

【文章來(lái)源】：南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2020,40(09)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 CKO小鼠的繁育
        1.2.2 基因型鑒定
        1.2.3 樣本收集
        1.2.4 Micro-CT
        1.2.5 破骨細(xì)胞的提取及培養(yǎng)
        1.2.6 免疫熒光染色
        1.2.7 RNA提取及實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitativereal-time PCR,RT-qPCR)
        1.2.8 蛋白提取及Western blot
        1.2.9 HE染色
        1.2.1 0 抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate resistant acid phosphatase,TRAP）染色
    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 Trio在破骨細(xì)胞中表達(dá)且集中于細(xì)胞邊緣
    2.2 Trio基因特異性敲除小鼠模型的鑒定
    2.3 CKO小鼠體型減小并表現(xiàn)出骨量增加
    2.4 體外培養(yǎng)的CKO小鼠破骨細(xì)胞數(shù)量減少
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Distinct functions of Trio GEF domains in axon outgrowth of cerebellar granule neurons[J]. Tao Tao,Jie Sun,Yajing Peng,Pei Wang,Xin Chen,Wei Zhao,Yeqiong Li,Lisha Wei,Wei Wang,Yanyan Zheng,Ye Wang,Xuena Zhang,Min-Sheng Zhu.  Journal of Genetics and Genomics. 2019(02)
[2]正畸驅(qū)動(dòng)的骨皮質(zhì)切開(kāi)術(shù)對(duì)巨噬細(xì)胞的作用及機(jī)制研究[J]. 王燕,朱琳琳,王思雨,張舒婷,孫雯,李琥,張瀚文,嚴(yán)斌.  南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2018(05)
[3]正畸牙齒移動(dòng)中破骨細(xì)胞活動(dòng)的影響因素[J]. 米雁翎,劉婷,蔣自然,張凡.  口腔醫(yī)學(xué). 2017(01)



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