目的探討建立適用于SD大鼠支氣管成纖維細胞原代培養(yǎng)的方法。方法取重量為150～180 g的SD雄性大鼠的支氣管組織,采用Ⅰ型膠原酶、木瓜蛋白酶聯(lián)合消化+組織塊黏附法、胰酶+膠原酶聯(lián)合消化（雙酶消化法）+組織塊黏附法、組織塊黏附法進行原代支氣管成纖維細胞的培養(yǎng)。利用鏡下觀察細胞的生長特點;免疫熒光染色法鑒定細胞的類型及純度;細胞的增殖活性用CCK-8檢測并繪制生長曲線。結(jié)果酶消化+組織塊黏附法培養(yǎng)使細胞游出速度更快、細胞數(shù)量產(chǎn)生更多。組織塊黏附法培養(yǎng)的細胞爬出相對緩慢、培養(yǎng)周期更長、獲得的細胞數(shù)量相對較少。CCK8增殖曲線呈S形。培養(yǎng)48 h,經(jīng)酶消化法分離得到的成纖維細胞已經(jīng)游出,約有60%以上細胞已經(jīng)貼壁,培養(yǎng)6～7 d可傳代。組織塊貼壁法培養(yǎng)5 d時,細胞開始從組織塊邊緣緩慢爬出,隨后從組織塊周圍延伸長,14 d左右可傳代。使用酶消化法培養(yǎng)的支氣管成纖維細胞中可混有雜細胞團,為提高成纖維細胞的純度可通過差速貼壁法純化。結(jié)論雙酶消化法+組織塊黏附法可以更高效、快速的分離和獲取支氣管成纖維細胞,為研究慢性阻塞性肺疾�。–OPD）氣道重塑提供了充足的種子細胞。 

【文章來源】：中國老年學(xué)雜志. 2020,40(09)北大核心

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

獲取支氣管組織

酶消化法培養(yǎng)的原代支氣管成纖維細胞(×200)

組織塊貼壁法培養(yǎng)的原代支氣管成纖維細胞(×200)

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3410096