發(fā)布時間：2021-09-22 20:25

　　為了得到高純度高得率的單核細胞（monocyte）并分析其在血栓發(fā)生中的作用,本研究利用10位健康人的血樣分離出單個核細胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）,并通過免疫磁珠分選來獲得單核細胞,測定PBMC與單核細胞的得率。通過制備血漿中的高豐度蛋白β2GPI,并與其抗體構成抗原抗體復合物來刺激細胞培養(yǎng),通過熒光定量PCR檢測細胞培養(yǎng)基中組織因子TF和TNF-α的含量,構建單核細胞炎癥激活模型。實驗結果顯示單核細胞的得率較高,純度和活性較好,且β2GPI純化效果好。熒光定量PCR結果顯示,與對照組相比,添加β2GPI抗原抗體復合物的實驗組TF與TNF-αmRNA表達量明顯增多。本實驗表明純化的單核細胞被充分激活,在細胞水平上為研究機體炎癥反應和血栓形成的分子機理提供了炎癥模型。 

【文章來源】：生物資源. 2020,42(02)

【文章頁數】：7 頁

【部分圖文】：

單核細胞原代分離照片

目前從人體外周血分離單核細胞的方法有很多，如加速紅細胞沉降法、細胞分離液不連續(xù)密度梯度分離法、貼壁法、流式分選法、免疫磁珠法、基于Fab的無痕親和細胞選擇（TACS?）技術、Colotta法、FicollHypaque密度分離法和密度梯度離心法等，各方法都有其優(yōu)缺點。如在Ficoll-Hypaque密度分離法中，首先是以1～5倍不等體積的Hank’s液或PBS液將肝素抗凝血稀釋，然后將其疊加于LTS1077分層液上（V稀釋血液∶V血液為1∶1～4∶1），離心后獲得單個核細胞PBMC，再通過洗滌、貼壁6～12h后得到單核細胞，該法所需稀釋液及分層液較多，離心液體量較大，且分離出的細胞層次也不太理想[11,12]。貼壁法獲得的單核細胞雖耗費時間短，成本低，但其單核細胞的純度和得率較低，因此其可應用于實驗研究的預試階段[15]。開展對細胞純度要求較高的實驗時，可以選用免疫磁珠法或流式分選法，但流式分選法獲得的細胞得率較低，耗費時間長，成本高，并且需要專門的技術人員操作，過程復雜[15]�；贔ab的無痕親和細胞選擇（TACS?）技術是一種相對較新的陽性選擇技術，它使用基于CD特異性低親和力Fab片段的免疫親和層析來可逆地捕獲和釋放靶細胞，雖也可以獲得高純度高得率的單核細胞，但其更適合于研究功能參數，其在準備單核細胞和進行單核細胞衍生的DC功能分析方面起著重要作用[16]。圖3 TF與TNF-αmRNA表達水平

TF與TNF-αmRNA表達水平

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3404331