DN A甲基化,作為新型的生物檢測(cè)標(biāo)志物,在人類疾病檢測(cè)和預(yù)后方面展示出巨大的應(yīng)用潛能。現(xiàn)已研發(fā)了傳統(tǒng)檢測(cè)和生物傳感器等方法實(shí)現(xiàn)了對(duì)DNA甲基化水平的檢測(cè),但是上述檢測(cè)技術(shù)由于設(shè)備昂貴或操作過(guò)程繁瑣等缺陷,限制了它們?cè)谂R床診斷上的應(yīng)用。石墨烯,因其優(yōu)良的導(dǎo)電性,已廣泛應(yīng)用于傳感領(lǐng)域,尤其是以單層石墨烯為通道的場(chǎng)效應(yīng)制備的晶體管（GFET）,因檢測(cè)靈敏度高,己實(shí)現(xiàn)了對(duì)多種生物分子的檢測(cè)。到目前為止,仍缺少關(guān)于利用GFET對(duì)DN A甲基化水平檢測(cè)的研究。因此,在本研究中,我們主要是開發(fā)一種基于GFET無(wú)標(biāo)的檢測(cè)方法實(shí)現(xiàn)對(duì)DN A甲基化的檢測(cè)。本研究中,我們選取谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶（GSTP1）啟動(dòng)子區(qū)域中中的一段序列,將該序列中的胞嘧啶進(jìn)行不同數(shù)目和不同位點(diǎn)的甲基化修飾后,作為本實(shí)驗(yàn)的目的序列。首先,為了 了解不同甲基化水平修飾的目的序列與DN A探針?lè)磻?yīng)的動(dòng)力學(xué),我們利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),對(duì)不同甲基化修飾水平的目的序列與DNA探針的雜交過(guò)程進(jìn)行系統(tǒng)的分析:同時(shí)利用熒光淬滅原理,觀測(cè)不同甲基化修飾水平的序列對(duì)DN A探針鏈置換反應(yīng)速率的影響。結(jié)果表明:無(wú)論足與DN A探針的雜交還是鏈置... 

【文章來(lái)源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁(yè)數(shù)】：88 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖２?甲基化異常對(duì)ＤＮＡ轉(zhuǎn)錄的影響??Ｆｉｇ．２?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?ａｂｎｏｒｍａｌ?ｍｃｔｈｙｌａｔｉｏｎ?ｏｎ?ＤＮＡ?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ??注：圖片引自參務(wù)文獻(xiàn)１５

異位點(diǎn)的過(guò)甲基化是癌細(xì)胞的兩個(gè)重要特征。低甲基化主要是導(dǎo)致了細(xì)胞內(nèi)原癌??基因的異常激活、印跡基因的缺失或者基因組的不穩(wěn)定而引發(fā)了癌癥的發(fā)生；過(guò)??甲基化主要是導(dǎo)致了抑癌基因和ＤＮＡ修復(fù)基因的失活而引發(fā)了癌癥（圖３?）Ｕ６－３７］。??閃此，人們Ｌｉ經(jīng)將ＤＮＡ甲基化的水平用于癌癥的篩查、分類、預(yù)后和癌癥治療??監(jiān)測(cè)等領(lǐng)域。??Ｃｅｎｔｒｏｍｅｒｅ?９?ｔ?ｔ?＊?卜??肴?Ｉ?１?｜?Ｉ?１?Ｉ?１?，?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ???／／???＾一＾??ＬＬＬＬ＾?ＴＳＧ?；???Ｈｙｐｅｒｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ?七」?ＣｐＧ?ｉｓｌａｎｄ??ｐｅｒｉｃｅｎｔｒｏｍｅｒｉｃ?（ｈｙｐｏｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ）??ｈｅｔｅｒｏｃｈｒｏｍａｔｉｎ??Ｉ?Ｈｙｐｏｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ?Ｈｙｐｅｒｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ??▼?＾??Ｍｉｔｏｔｉｃ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ，?Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ?ｒｅｐｒｅｓｓｉｏｎ，??ｇｅｎｏｍｉｃ?ｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙ?ｌｏｓｓ?ｏｆ?ＴＳＧ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ??？?ＤＮＡ?ｔｅｐｅａ！?＇?．??Ｉ?Ｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ??麗?Ｕｎｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ??圖３?ｄｎａ序列的過(guò)甲基化和去甲基化與癌癥引發(fā)的關(guān)系??Ｆｉｇ．３?Ｔｈｅ?ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ?ｂｅｔｗｅｅｎ?Ｉ）Ｎ八（ｌｉｙｐｏ／ｈｙｐｃｉ．）?ｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ?ａｎｄ?ｈｕｍａｎ?ｃａｎｃｅｒ??注：屬片闢自參芩殳獻(xiàn)１６。??Ｈ的

１．３?傳統(tǒng)方式對(duì)ＤＮＡ甲基化的檢測(cè)??在過(guò)去的２０年里，人們己經(jīng)開發(fā)出多種用于檢測(cè)生物組織或者體液中ＤＮＡ??甲基化水平的技術(shù)［５”，所有的方法均需要通過(guò)以下三個(gè)步驟來(lái)完成（圖４）。簡(jiǎn)??介如下：首先，通過(guò)亞硫酸氫鈉轉(zhuǎn)化法＿、中基敏感型限制性內(nèi)切酶酶切法和特異??性親和吸附純化等三種方法實(shí)現(xiàn)ＤＮＡ甲基化序列的分離。其中亞硫酸氫鈉轉(zhuǎn)化??法使用的最為廣泛，該種方法主要是依賴于亞硫酸氫鈉能夠?qū)ⅲ棉D(zhuǎn)化成尿嘧啶??（Ｕ）


本文編號(hào)：3382278