第一部分（一）研究背景細胞凋亡是一種主動、有序、多基因調(diào)控的細胞逐漸死亡過程,是生命的基本現(xiàn)象之一。細胞凋亡大致可分為caspase依賴的和caspase非依賴的細胞凋亡兩大類。目前,研究認為凋亡誘導因子AIF在caspase非依賴的細胞凋亡途徑中起著關(guān)鍵作用。1.AIF是定位于線粒體膜間隙的黃素結(jié)合蛋白,其在特定的凋亡誘導信號刺激下,會從線粒體轉(zhuǎn)移到核內(nèi)從而引起染色質(zhì)凝縮和DNA片段化。2.研究也發(fā)現(xiàn)與AIF同源的AIFM2（又名AMID）同樣可以引起caspase非依賴的細胞凋亡。（1）AIFM2在結(jié)構(gòu)上雖然與AIF相比缺失了線粒體定位序列片段,但是均具有與細菌氧化還原酶高度同源的NADH氧化還原酶區(qū),可以結(jié)合一個FAD和一個NADH。（2）AIFM2大部分位于線粒體外膜,少數(shù)位于胞漿。雖然詳細的機制還沒有被研究清楚,已有的報道表明AIFM2對細胞核以及染色質(zhì)的作用與AIF相似。另外bcl-2不能抑制AIFM2誘導的凋亡。為了探究AIFM2發(fā)揮生物學功能的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)和分子機制,我們對AIFM2進行了結(jié)構(gòu)與功能的初步研究。（二）研究結(jié)果1.我們建立了AIFM2全長重組蛋白及突變體（含截... 

【文章來源】：山東大學山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１坐滴法結(jié)晶板中單個密閉結(jié)晶小室示意圖??

章實驗結(jié)果??ＩＦＭ２全長蛋白表達純化及功能初步研宄??蛋白分析??ＡＩＦＭ２蛋白是黃素結(jié)合蛋白，根據(jù)ＡＩＦ家族蛋白的特點，它應該至少兩種小分子，即ＦＡＤ和ＮＡＤＨ。根據(jù)ＤＮＡｓｔａｒ軟件對其組成的分析，長３７３個氨基酸，分子量４０．５ｋＤ，蛋白質(zhì)等電點為９．１４。另外，該蛋個半胱氨酸，在純化過程中可以考慮加還原型保護劑，防止蛋白聚用ＰｓｉＰｒｅｄ網(wǎng)站對其二級結(jié)構(gòu)的預測。根據(jù)以上分析，我們考慮從表長蛋白入手，另外構(gòu)建幾個截短體。其中截短體包括２８－３７３?（截去Ｎ）和１－３１６?（截去Ｃ端Ｐ片區(qū)）。??

?山東大學碩士學位論文???３．１．２蛋白表達與純化??在重組質(zhì)粒ｐＥＴ２８ａ－ｓｕｍｏ－ＡＩＦＭ２測序正確的情況下，我們首先培養(yǎng)了?１?Ｌ的??菌并誘導表達。經(jīng)鎳柱純化后的蛋白粗品呈黃綠色，見圖３－２，應該結(jié)合有ＦＡＤ??分子。ＵＬＰ１蛋白酶切后的蛋白溶液依次進行Ｈｅｐａｒｉｎ柱和分子篩（Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００）??純化，然后進行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ電泳檢測，詳見圖３－３和圖３－４。結(jié)果顯示過量表達且??用ＵＬＰ１蛋白酶切開后的蛋白條帶與目的蛋白理論值４０．５?ｋＤ吻合，切掉的碎片與??ｓｕｍｏ標簽蛋白大�。ǎ保�?ｋＤ）?—致，根據(jù)結(jié)果我們初步判斷蛋白表達正�？梢赃M??行后續(xù)實驗。??．．


本文編號：3381032