蛋白質(zhì)棕櫚�；揎検且环N可逆的翻譯后修飾,在調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)間相互作用、蛋白質(zhì)的膜定位及細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)等過程中起著關(guān)鍵作用,同時(shí)心臟組織中的G蛋白偶聯(lián)受體（GPCR）、跨膜鈉/鉀泵和電壓門控鈉通道等蛋白質(zhì)均受到棕櫚�；揎椀恼{(diào)節(jié)。利用酰基-生物素置換法（Acyl-biotinyl exchange,ABE）對(duì)棕櫚�；鞍踪|(zhì)的檢測已經(jīng)日益成熟,但是已有研究主要集中于神經(jīng)系統(tǒng),對(duì)心臟組織中的相關(guān)修飾研究較少。因此本研究利用ABE方法對(duì)心臟組織中的棕櫚�；揎椀鞍踪|(zhì)進(jìn)行檢測及質(zhì)譜鑒定,并對(duì)ABE方法進(jìn)行優(yōu)化,進(jìn)一步提高檢測效率。在本研究中,采用生物素化試劑Biotin-HPDP對(duì)小鼠心臟組織中的棕櫚�；鞍踪|(zhì)進(jìn)行標(biāo)記,成功鑒定出50個(gè)棕櫚酰化修飾的蛋白質(zhì)。此外,建立了基于多肽水平的ABE方法,對(duì)棕櫚�；鞍踪|(zhì)進(jìn)行快速標(biāo)記。在這一方法中,通過將多肽樣品吸附至固相萃取柱,使反應(yīng)緩沖液流過柱子并與吸附在柱上的多肽樣品反應(yīng),在每一步反應(yīng)后僅通過洗滌柱子便可以達(dá)到去除殘余試劑的目的,這一方法簡化了操作步驟,大大的縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。本研究中確定最優(yōu)實(shí)驗(yàn)條件是酶解為多肽后使用10 mmol/L N-乙基馬來酰亞胺... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

蛋白質(zhì)動(dòng)態(tài)棕櫚酰化修飾過程

淀法對(duì)樣品損失的影響應(yīng)后的蛋白樣品經(jīng) 3 次 CM 沉淀除去未反應(yīng)的 Biotin-H 3 次沉淀后溶解的蛋白樣品各 10μL，加入不含有還S-PAGE 電泳，隨后對(duì)其進(jìn)行轉(zhuǎn)膜，轉(zhuǎn)膜結(jié)束后，用 Str的棕櫚�；鞍踪|(zhì)進(jìn)行識(shí)別。從圖 2.2 可以看出，隨色越來越淺，即蛋白含量越來越少，說明沉淀次數(shù)對(duì)

圖 2.1 Western blot 方法驗(yàn)證酰基生物素置換法（ABE）的可行性 蛋白沉淀法對(duì)樣品損失的影響ABE 反應(yīng)后的蛋白樣品經(jīng) 3 次 CM 沉淀除去未反應(yīng)的 Biotin-HPDP的樣品及 3 次沉淀后溶解的蛋白樣品各 10μL，加入不含有還原劑進(jìn)行 SDS-PAGE 電泳，隨后對(duì)其進(jìn)行轉(zhuǎn)膜，轉(zhuǎn)膜結(jié)束后，用 Streptav物素標(biāo)記的棕櫚�；鞍踪|(zhì)進(jìn)行識(shí)別。從圖 2.2 可以看出，隨著沉

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]蛋白質(zhì)棕櫚酰化修飾的分析方法進(jìn)展[J]. 方彩云,張曉勤,陸豪杰.  分析化學(xué). 2014(04)



本文編號(hào)：3377835