豬δ冠狀病毒（Porcine deltacoronavirus,PDCoV）是一種新發(fā)現(xiàn)的腸道冠狀病毒,能引起新生仔豬腹瀉、嘔吐、脫水、死亡,致死率能達到30%～40%,嚴重降低了新生仔豬的存活率,影響了養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。在我國已經(jīng)有多個省份分離了PDCoV地方株,但至今未見PDCoV陜西地方株分離的報道。成功分離PDCoV地方株對陜西地區(qū)PDCoV發(fā)病機制研究、病毒學和血清學分析以及疫苗開發(fā)具有重要意義。表達PDCoV的結構蛋白為后續(xù)開發(fā)診斷試劑和潛在的PDCoV亞單位疫苗提供了基礎。本試驗采集陜西省西安某豬場腹瀉仔豬的腸道及內容物,利用豬睪丸（ST）細胞進行病原分離,細胞出現(xiàn)明顯病變時,利用RT-PCR方法擴增PDCoV西安株M全基因序列并測序,探究其B細胞表位是否發(fā)生改變。將M基因與表達載體p ET-32a構建重組質粒,轉入到BL21（DE3）菌株誘導表達,以純化的重組蛋白免疫小鼠制得多克隆抗體。本研究取得如下結果:1. PDCoV分離株盲傳5代,感染ST細胞72 h后出現(xiàn)細胞病變,主要表現(xiàn)為細胞變圓、變大、聚集和脫落。RT-PCR檢測顯示PDCoV陽性,命名為CHN-XA18-35... 

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【學位級別】：碩士

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引起豬病毒性疾病的六種冠狀病毒Figure1-1Sixcoronavirusesthatcauseviraldiseasesinswine

腸組織病變及免疫組化染色（Chenetal.2015）

西北農林科技大學碩士學位論文142.3.1PDCoV分離的結果PDCoV盲傳5代，感染ST細胞48h后出現(xiàn)輕微細胞病變，主要表現(xiàn)為細胞變圓，細胞界限變得不清晰；接毒72h后，細胞病變更為明顯，主要表現(xiàn)為細胞變圓、變大、聚集和脫落（圖2-1）。RT-PCR法檢測病毒培養(yǎng)物發(fā)現(xiàn)，從西安分離的毒株成PDCoV陽性，命名為CHN-XA18-35株。圖2-1PDCoV引起ST細胞特征性病變（100×）Figure2-1ThecharacteristicpathogenicityofSTcellsafterinfectedbyPDCoV(100×)A.ST細胞正常形態(tài)；B.PDCoV感染ST細胞48h后的病變；C.PDCoV感染ST細胞72h后的病變A.STcellsnormalmorphology;B.Cytopathiceffectafter48hoursofPDCoVinfection;C.Cytopathiceffectafter72hoursofPDCoVinfection2.3.2TCID50計算結果連續(xù)觀察一周，待半數(shù)細胞孔發(fā)生細胞病變，按照Reed-munch法計算TCID50，記錄的出現(xiàn)細胞病變結果見表2-3。表2-3豬δ冠狀病毒TCID50的觀察記錄結果Table2-3TheTCID50resultsofPDCoV稀釋度Dilutionration接種細胞孔Inoculationcellwells無病變孔數(shù)Numberofnon-CPEwells有病變孔數(shù)NumberofCPEwells無病變孔數(shù)累積Totalnumberofnon-CPEwells有病變孔數(shù)累積TotalnumberofCPEwells細胞病變比例Cytopathicratio出現(xiàn)細胞病變率(%)Cytopathicrate(%)10-180804343/4310010-280803535/3510010-380802727/2710010-480801919/1910010-582621111/1384.610-6853755/1241.7

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]豬δ冠狀病毒的分離、鑒定及熒光定量PCR檢測方法的建立[D]. 肖帥.甘肅農業(yè)大學 2018
[2]豬丁型冠狀病毒HB-BD株分離鑒定及生物學特性研究[D]. 劉寶京.河北農業(yè)大學 2018
[3]豬δ冠狀病毒江西分離株CH/JX/JGS/01的細胞培養(yǎng)特性與遺傳進化分析[D]. 張敏.江西農業(yè)大學 2018
[4]豬δ冠狀病毒RT-PCR、RT-LAMP及間接ELISA檢測方法的建立及應用[D]. 張帆帆.江西農業(yè)大學 2017
[5]豬丁型冠狀病毒檢測方法的建立及JS-LYG-2014毒株的分離與鑒定[D]. 逄鳳嬌.南京農業(yè)大學 2017



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