CRISPR/Cas系統(tǒng)是細(xì)菌和古生菌在長期進(jìn)化過程中所產(chǎn)生的抵抗外源核酸入侵的免疫系統(tǒng)。該系統(tǒng)可以由人工設(shè)計(jì)的gRNA與Cas蛋白復(fù)合對(duì)目標(biāo)DNA進(jìn)行切割,設(shè)計(jì)模版tDNA通過宿主細(xì)胞中自身HDR系統(tǒng)修復(fù)獲得所需基因編輯。本論文旨在利用自行分離、鑒定、命名、并已證明能在原核及真核微生物中可對(duì)基因組中基因進(jìn)行自打靶以及非自打靶基因的I-B-Svi CRISPR-Cas3系統(tǒng)對(duì)HEK293T和NIH3T3細(xì)胞中的靶DNA序列進(jìn)行編輯改造。作為靶細(xì)胞研究的人胚腎細(xì)胞HEK293T和鼠NIH3T3細(xì)胞是模式哺乳細(xì)胞,具有生長較快、易轉(zhuǎn)染培養(yǎng),且適合胞內(nèi)表達(dá)之特點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)首先用非堿基優(yōu)化的Type I-B-Svi CRISPR/Cas3系統(tǒng)和商業(yè)化的CRISPR/Cas9系統(tǒng)的基因編輯工具探索并掌握了哺乳細(xì)胞中的編輯操作。在293T細(xì)胞中的drosha基因（靶標(biāo):Exon4）和3T3細(xì)胞中的vegfa基因的（靶標(biāo):Exonl）基因編輯中,分別設(shè)計(jì)了基于hcas3的g-drosha和與靶標(biāo)位點(diǎn)兩側(cè)具有同源臂序列的t-drosha::egfp和基于scas3和hcas9的g-vegfa和與靶標(biāo)位點(diǎn)兩... 

【文章來源】：安徽大學(xué)安徽省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：102 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１?ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ基因編輯系統(tǒng)機(jī)制圖??Ｆｉｇｕｒｅ?１－１?Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｔｈｅ?ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ?ｇｅｎｅ?ｅｄｉｔｉｎｇ?ｓｙｓｔｅｍ??

?Ｔａｒｇｅｔ＾ｌｅａｖａｇｅ?■?ｇｅｎｏｍｅ??圖１－１?ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ基因編輯系統(tǒng)機(jī)制圖??Ｆｉｇｕｒｅ?１－１?Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｔｈｅ?ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ?ｇｅｎｅ?ｅｄｉｔｉｎｇ?ｓｙｓｔｅｍ??１．２?ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系統(tǒng)在細(xì)胞中的應(yīng)用??與其他形式的基因編輯工具相比，ＣＲＩＳＰＲ?／?Ｃａｓ基因編輯工具使得細(xì)胞中??ＤＮＡ的靶向變得更容易。這項(xiàng)革命性的技術(shù)為研宂基因功能提供了絕佳的機(jī)會(huì)，??２??

正是由于ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系統(tǒng)前景良好的應(yīng)用價(jià)值，使得該系統(tǒng)成為時(shí)下較??為熱門的研究領(lǐng)域，但來源于不同生物的ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系統(tǒng)應(yīng)用前景不同，因??此進(jìn)一步拓展和開發(fā)ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系統(tǒng)在生物領(lǐng)域具有巨大價(jià)值。??１．３?ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系統(tǒng)的分類??ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系統(tǒng)根據(jù)Ｃａｓ蛋白的不同主要分為２大類，其中１類目前主要??分為三型（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ?ｔｙｐｅｓ?１，丨丨１，ａｎｄ?ＩＶ?）?［２４］在自然界中分布較廣主要存在于??細(xì)菌和古細(xì)菌中，１類ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ系統(tǒng)中常見多個(gè)Ｃａｓ效應(yīng)蛋白，但具體作??用機(jī)制仍不清晰。２類目前也分為三型（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ?ｔｙｐｅｓ?ＩＩ，Ｖ，?ａｎｄ?Ｖ丨）［２；＞］主??要存在于細(xì)菌中，其分布不如１類，２類ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ系統(tǒng)中主要為單Ｃａｓ效??應(yīng)蛋白，是目前研宄較為廣泛的一類ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ系統(tǒng)。??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]新一代基因組編輯系統(tǒng)CRISPR/Cpf1[J]. 楊帆,李寅.  生物工程學(xué)報(bào). 2017(03)

碩士論文
[1]維吉尼亞鏈霉菌IBL14中sviscsn基因簇功能分析[D]. 許鑫.安徽大學(xué) 2017
[2]維吉尼亞鏈霉菌IBL14中I-B-svi型CRISPR-Cas系統(tǒng)及青霉素代謝相關(guān)酶基因自敲除[D]. 邱彩花.安徽大學(xué) 2017
[3]維吉尼亞鏈霉菌IBL14中的CRISPR-Cas系統(tǒng)及其基因編輯方法[D]. 雍德祥.安徽大學(xué) 2016



本文編號(hào)：3355119