發(fā)布時(shí)間：2021-08-19 11:25

　　油菜花葉病毒（Oil-Seed Mosaic Virus,ORMV）是一種典型的煙草花葉病毒屬病毒,能侵染油菜、擬南芥等十字花科植物。該RNA病毒編碼4種蛋白質(zhì),分別為126kDa復(fù)制酶蛋白、183kDa復(fù)制酶蛋白、運(yùn)動(dòng)蛋白和外殼蛋白,其中126kDa復(fù)制酶蛋白可以在體外特異性地結(jié)合21nt的小RNA,進(jìn)而影響靶mRNA的表達(dá)及功能。本研究在擬南芥和本氏煙中過(guò)量表達(dá)ORMV-126kDa復(fù)制酶蛋白,為進(jìn)一步研究該蛋白對(duì)植物體內(nèi)小RNA的富集作用及該蛋白對(duì)小RNA功能和代謝的影響打下基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)以野生型本氏煙草（Nicotiana benthamiana）的葉片為外植體,研究了不同激素配比和激素濃度對(duì)煙草離體再生分化的影響、不同AgNO₃濃度及不同結(jié)冷膠濃度對(duì)生芽的影響和不同NAA濃度對(duì)生根的影響,對(duì)本氏煙草離體再生體系進(jìn)行優(yōu)化;同時(shí)研究了不同卡那霉素（Kanamycin,Kan）和草甘膦（Basta）的篩選濃度、頭孢霉素的抑菌濃度、侵染時(shí)間、預(yù)培養(yǎng)及共培養(yǎng)時(shí)間和乙酰丁香酮（Acetosyringone,AS）濃度對(duì)煙草遺傳轉(zhuǎn)化的影響。建立了高效的本氏煙遺傳轉(zhuǎn)化體系... 

【文章來(lái)源】：聊城大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：54 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

誘導(dǎo)表達(dá)的雙組分系統(tǒng)

件的 pMDC150 和含有響應(yīng)元件的 pMDC160。主要作用原理為：激活元件中的 35S啟動(dòng)子啟動(dòng) XVE 基因表達(dá)并產(chǎn)生轉(zhuǎn)錄激活因子，用 17β-雌二醇進(jìn)行誘導(dǎo)后，轉(zhuǎn)錄激活因子 XVE 會(huì)結(jié)合 OlexA-TATA 啟動(dòng)子，進(jìn)而啟動(dòng)下游 GUS 基因的表達(dá)[35]。圖 1-1 誘導(dǎo)表達(dá)的雙組分系統(tǒng)[35]Figure 1-1 Two-component system for inducing expression

圖 1-3 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化模型[43]Figure 1-3 Agrobacterium-mediated genetic transformation model1.3.2 農(nóng)桿菌介導(dǎo)植物遺傳轉(zhuǎn)化的影響因素影響農(nóng)桿菌介導(dǎo)的植物遺傳轉(zhuǎn)化效率的條件是多方面的。一方面外植體的類型、載體質(zhì)粒、細(xì)菌菌株、培養(yǎng)基及組成等不同，轉(zhuǎn)化結(jié)果也不盡相同，另一方面，農(nóng)桿菌的侵染濃度、侵染時(shí)間、預(yù)培養(yǎng)和共培養(yǎng)條件甚至后期篩選中所用抗生素的濃度都會(huì)對(duì)農(nóng)桿菌的侵染效率產(chǎn)生影響[44-47]。部分化學(xué)品在轉(zhuǎn)化過(guò)程中的使用也會(huì)提高轉(zhuǎn)化的效率[48]。一些表面活性劑可以通過(guò)降低表面張力來(lái)能幫助農(nóng)桿菌更加有效的附著到植物細(xì)胞或組織上，有助于侵染效率的提高[49]。1.農(nóng)桿菌濃度和侵染時(shí)間對(duì)愈傷生長(zhǎng)和分化的影響以 600 nm 的吸光值為標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定農(nóng)桿菌菌液的濃度，此時(shí)農(nóng)桿菌活力較強(qiáng)，處于生長(zhǎng)對(duì)數(shù)時(shí)期，菌液的濃度不同會(huì)造成不同的侵染效果。侵染菌液 OD600值介于0.5-0.8 為最適的侵染濃度，由于此時(shí)農(nóng)桿菌的活性強(qiáng)，易于轉(zhuǎn)化進(jìn)入受體宿主細(xì)胞，

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3351323