蛋白磷酸化是一種重要的蛋白質(zhì)翻譯后修飾方式,幾乎參與植物所有生命過程的調(diào)節(jié)。蛋白磷酸化過程主要指在蛋白激酶的催化作用下,將三磷酸腺苷（ATP）上的γ位磷酸基團轉(zhuǎn)移到底物蛋白特定氨基酸殘基上的過程。底物蛋白上被磷酸化的常見氨基酸有絲氨酸、蘇氨酸及酪氨酸,磷酸基團與氨基酸中的羥基通過酯鍵連接。該文詳細描述了幾種常用的蛋白質(zhì)體外及體內(nèi)磷酸化的檢測方法及注意事項。 

【文章來源】：植物學(xué)報. 2020,55(01)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

Phos-tag gel和SDS-PAGE gel電泳后,免疫印跡檢測磷酸化蛋白的對比分析

擬南芥幼苗總蛋白雙向凝膠電泳后的磷酸化蛋白Pro-Q Diamond染色檢測分析

(5)激酶級聯(lián)反應(yīng)中涉及2個以上的激酶,反應(yīng)過程稍微復(fù)雜一些,但反應(yīng)體系與條件不變。例如,激酶A磷酸化激活激酶B,再磷酸化底物蛋白C的反應(yīng):第1步反應(yīng)體系30μL(50 mmol·L–1 Tris-HCl緩沖液,pH7.5,0.1μg激酶A,1.0μg激酶B,50μmol·L–1 ATP,10 mmol·L–1 MgCl2或MnCl2或CaCl2),30°C反應(yīng)30分鐘;第2步反應(yīng)體系30μL(50 mmol·L–1 Tris-HCl緩沖液,pH7.5,0.1μg第1步反應(yīng)激活的激酶B,1.0μg底物蛋白C,25μmol·L–1 ATP,1μCi[γ-32P]-ATP,10 mmol·L–1 MgCl2或MnCl2或CaCl2),30°C反應(yīng)30分鐘。加入10μL 4×SDS樣品緩沖液終止反應(yīng),95°C反應(yīng)5分鐘。制好的樣品用于凝膠電泳分離。4.2 Phos-tag gel電泳-免疫印跡結(jié)合的蛋白質(zhì)磷酸化分析方法

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Regulation of p53 acetylation[J]. Wei-Guo Zhu.  Science China（Life Sciences）. 2017(03)
[2]蛋白質(zhì)組中蛋白質(zhì)磷酸化研究進展[J]. 楊策,王正國,朱佩芳.  生理科學(xué)進展. 2004(02)



本文編號：3313163