蛋白磷酸化是一種重要的蛋白質翻譯后修飾方式,幾乎參與植物所有生命過程的調節(jié)。蛋白磷酸化過程主要指在蛋白激酶的催化作用下,將三磷酸腺苷（ATP）上的γ位磷酸基團轉移到底物蛋白特定氨基酸殘基上的過程。底物蛋白上被磷酸化的常見氨基酸有絲氨酸、蘇氨酸及酪氨酸,磷酸基團與氨基酸中的羥基通過酯鍵連接。該文詳細描述了幾種常用的蛋白質體外及體內磷酸化的檢測方法及注意事項。 

【文章來源】：植物學報. 2020,55(01)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

Phos-tag gel和SDS-PAGE gel電泳后,免疫印跡檢測磷酸化蛋白的對比分析

擬南芥幼苗總蛋白雙向凝膠電泳后的磷酸化蛋白Pro-Q Diamond染色檢測分析

(5)激酶級聯(lián)反應中涉及2個以上的激酶,反應過程稍微復雜一些,但反應體系與條件不變。例如,激酶A磷酸化激活激酶B,再磷酸化底物蛋白C的反應:第1步反應體系30μL(50 mmol·L–1 Tris-HCl緩沖液,pH7.5,0.1μg激酶A,1.0μg激酶B,50μmol·L–1 ATP,10 mmol·L–1 MgCl2或MnCl2或CaCl2),30°C反應30分鐘;第2步反應體系30μL(50 mmol·L–1 Tris-HCl緩沖液,pH7.5,0.1μg第1步反應激活的激酶B,1.0μg底物蛋白C,25μmol·L–1 ATP,1μCi[γ-32P]-ATP,10 mmol·L–1 MgCl2或MnCl2或CaCl2),30°C反應30分鐘。加入10μL 4×SDS樣品緩沖液終止反應,95°C反應5分鐘。制好的樣品用于凝膠電泳分離。4.2 Phos-tag gel電泳-免疫印跡結合的蛋白質磷酸化分析方法

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Regulation of p53 acetylation[J]. Wei-Guo Zhu.  Science China（Life Sciences）. 2017(03)
[2]蛋白質組中蛋白質磷酸化研究進展[J]. 楊策,王正國,朱佩芳.  生理科學進展. 2004(02)



本文編號：3313163