發(fā)布時間：2021-07-26 20:33

　　[目的]骨質(zhì)疏松癥（Osteoporosis,OP）是一類發(fā)病率高、危害大,易發(fā)生脆性骨折為特征的全身代謝性骨病。骨髓間充質(zhì)干細胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs）成骨分化能力減弱,成脂分化能力增強是導(dǎo)致OP的原因之一,改變BMMSCs分化方向成為治療OP的潛在方法。微小RNA（microRNA,miRNA）是一類廣泛存在于真核細胞生物的短序列非編碼RNA,通過降解靶基因mRNA或抑制翻譯來調(diào)節(jié)細胞的增殖、分化和凋亡等過程。最近的研究表明miRNA在BMMSCs成骨分化中具有重要的調(diào)節(jié)作用,關(guān)于其在成骨發(fā)生發(fā)展過程中所起的作用,已經(jīng)日益成為研究熱點。前期課題組發(fā)現(xiàn)miR-223-3p在骨質(zhì)疏松小鼠BMMSCs中表達上調(diào),但其是否導(dǎo)致了 OP的發(fā)生發(fā)展至今未見報導(dǎo)。本課題旨在研究miR-223-3p在人骨髓間充質(zhì)干細胞（human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMMSCs）成骨分化中的作用,預(yù)測并驗證其靶基因,闡明miR-223-3p調(diào)控hBMMSCs成骨分化的分子機制,以期為OP的診斷和治療... 

【文章來源】：昆明醫(yī)科大學(xué)云南省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１原帶ｈＢＭＭＳＣｓ接種３ｄ和１０ｄ后倒置顯微鏡下細胞形態(tài)??

疏松的發(fā)生，如影響成骨細胞或破骨細??胞分化、增殖及凋亡等，那么ｍｉＲ－２２３－３ｐ是否通過影響ｈＢＭＭＳＣｓ的成骨分化??而導(dǎo)致骨質(zhì)疏松呢？我們在ｈＢＭＭＳＣｓ完全培養(yǎng)基中加入經(jīng)典的成骨誘導(dǎo)因子??地塞米松、抗壞血酸和卩甘油磷酸鈉使其向成骨細胞方向分化。在誘導(dǎo)前（Ｏｈ）??和誘導(dǎo)后１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ、７ｄ分別提取細胞總ＲＮＡ，進行ｑＲＴ－ＰＣＲ技術(shù)??檢測ｍｉＲ－２２３－３ｐ的表達變化。結(jié)果表明ｍｉＲ－２２３－３ｐ在ｈＢＭＭＳＣｓ成骨誘導(dǎo)分化??過程中呈時間依耐性下降（圖３），加入成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)液４８ｈ后，ｍｉＲ－２２３－３ｐ出??現(xiàn)顯著性下降，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（Ｐ＜０．０１），之后隨著誘導(dǎo)時間的延長，??ｍｉＲ－２２３－３ｐ的下降程度更明顯，提示ｍｉＲ－２２３－３ｐ在ｈＢＭＭＳＣｓ成骨分化過程中??具有重要意義。??ｓｏ??１．５－１??卜?ｉｉｒｒ??Ｏ－Ｏ－Ｌ＾Ｗ?１?＾＾?，???自?＾?＾?＾??圖３?ｑＲＴ－ＰＣＲ檢測ｈＢＭＭＳＣｓ成骨誘導(dǎo)分化過程中ｍｉＲ－２２３－３ｐ表達趨勢（＊＊?Ｐ＜０．０１，?＊＊＊??Ｐ＜０．００１?ｖｓ?Ｏｈ）??２５??

ｖｏ??Ｉ．２．０－，?＊＊＊??＾??１??？?丨１??Ｓ１５－?十??ｉ?一＾??〇?１．０－??°．５．?ｍＫ??ｉ?ｏ．ｏＵＩ＾Ｈ?，???＾?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ??圖２骨量正常組和骨質(zhì)疏松組ｈＢＭＭＳＣｓ中ｍｉＲ－２２３－３ｐ表達水平分析（＊＊＊，Ｐ＜０．００１）??３?ｍｉＲ－２２３－３ｐ在ｈＢＭＭＳＣｓ成骨誘導(dǎo)分化過程中表達下降??ｍｉＲＮＡ可能通過多種機制參與骨質(zhì)疏松的發(fā)生，如影響成骨細胞或破骨細??胞分化、增殖及凋亡等，那么ｍｉＲ－２２３－３ｐ是否通過影響ｈＢＭＭＳＣｓ的成骨分化??而導(dǎo)致骨質(zhì)疏松呢？我們在ｈＢＭＭＳＣｓ完全培養(yǎng)基中加入經(jīng)典的成骨誘導(dǎo)因子??地塞米松、抗壞血酸和卩甘油磷酸鈉使其向成骨細胞方向分化。在誘導(dǎo)前（Ｏｈ）??和誘導(dǎo)后１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ、７ｄ分別提取細胞總ＲＮＡ，進行ｑＲＴ－ＰＣＲ技術(shù)??檢測ｍｉＲ－２２３－３ｐ的表達變化。結(jié)果表明ｍｉＲ－２２３－３ｐ在ｈＢＭＭＳＣｓ成骨誘導(dǎo)分化??過程中呈時間依耐性下降（圖３），加入成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)液４８ｈ后，ｍｉＲ－２２３－３ｐ出??現(xiàn)顯著性下降，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（Ｐ＜０．０１），之后隨著誘導(dǎo)時間的延長，??ｍｉＲ－２２３－３ｐ的下降程度更明顯，提示ｍｉＲ－２２３－３ｐ在ｈＢＭＭＳＣｓ成骨分化過程中??具有重要意義。??ｓｏ??１．５－１??卜?ｉｉｒｒ??Ｏ－Ｏ－Ｌ＾Ｗ?１?＾＾?，???自?＾?＾?＾??圖３?ｑＲＴ－ＰＣＲ檢測ｈＢＭＭＳＣｓ成骨誘導(dǎo)分化過程中ｍｉＲ－２２３－３ｐ表達趨勢（＊＊?Ｐ＜０．０１，?＊＊＊??Ｐ＜０．００１?ｖｓ?Ｏｈ）??２５?

【參考文獻】：
期刊論文
[1]TGF-β and BMP signaling in osteoblast,skeletal development,and bone formation,homeostasis and disease[J]. Mengrui Wu,Guiqian Chen,Yi-Ping Li.  Bone Research. 2016(01)
[2]微小RNA與成骨細胞的分化[J]. 王振恒,王瑞,趙建寧.  中國組織工程研究. 2012(46)
[3]骨質(zhì)疏松癥中國白皮書[J]. EditorialBoardofOsteoporosisPreventionandTreatment(ChinaWhitePaper),ChinaHealthPromotionFoundation.  中華健康管理學(xué)雜志. 2009(3)
[4]中國原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥流行病學(xué)[J]. 趙燕玲,潘子昂,王石麟,王虔,劉京萍,劉忠厚.  中國骨質(zhì)疏松雜志. 1998(01)



本文編號：3304322