單細胞測序技術目前雖已廣泛應用于人類、動物、微生物等物種的研究,但由于細胞壁的存在,使得該技術在植物上的應用舉步維艱。如果能先分離出植物單條染色體,然后再應用單細胞測序技術進行擴增和測序,則可以避免細胞壁的干擾,從而具有重要的應用價值。雖然科研人員一直嘗試針對單條植物染色體進行測序,但目前尚未見有成功的報道,也未見有文章對失敗的原因進行討論。該研究以六倍體中國春小麥為材料,針對使用單細胞測序技術進行單染色體擴增過程中出現(xiàn)的假陽性問題進行了探討,分析了單染色體擴增失敗的主要原因,并通過高通量測序技術研究了外源污染的可能來源。結果表明:在對實驗器具、耗材、環(huán)境污染嚴格防控的基礎上,人體接觸可能是造成污染的主要來源;同時,推測單染色體之所以擴增失敗可能是因為染色體自身超螺旋狀態(tài)造成引物難以結合和復制。該研究還針對存在的問題提出了可行性建議,為將來成功進行單染色體測序提供了有益的借鑒。 

【文章來源】：廣西植物. 2020,40(01)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 植物材料
    1.2 方法
        1.2.1 小麥中期染色體制備和單條染色體分離
        1.2.2 染色體MALBAC擴增
        1.2.3 染色體MDA擴增
        1.2.4 污染源排除實驗
        1.2.5 SCoT分子標記檢測
        1.2.6 Southern雜交鑒定
        1.2.7 高通量測序
2 結果與分析
    2.1 小麥中期染色體制備和顯微分離
    2.2 MALBAC和MDA方法對小麥染色體進行擴增出現(xiàn)假陽性現(xiàn)象
    2.3 可能污染源的排除
    2.4 使用SCo T分子標記對擴增結果進行初步驗證
    2.5 使用Southern印跡對擴增結果進行驗證
    2.6 高通量測序和序列比對驗證污染類型及可能來源
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]病原微生物實驗室實驗操作產生氣溶膠風險定量研究[J]. 杜茜,王洪寶,劉克洋,張柯,楊文慧,胡凌飛,王潔,李娜,溫占波,李勁松.  軍事醫(yī)學. 2015(12)
[2]柚（Citrus grandis Osbeck）單染色體LA-PCR-AFLP技術體系中外源污染的防控[J]. 王發(fā)明,王平,唐琦,柳燕貞,陳偉.  熱帶作物學報. 2010(12)



本文編號：3252181