由于編輯效率高且構(gòu)建快速,CRISPR/Cas9技術(shù)極大地推動了外源基因的定點整合研究。外源基因的有效敲入,需要安全位點允許其整合和有效表達,并且不影響細胞或生物體內(nèi)的內(nèi)在基因功能。目前,豬基因組中用于外源基因整合的常用的兩個位點:Rosa26位點和H11位點。然而,用于轉(zhuǎn)基因研究和制備基因編輯動物的安全整合位點還遠遠不夠。因此,這就需要我們在豬基因組中尋找更多適合外源基因整合的位點。本研究主要以豬miR-17-92基因簇為研究對象,利用CRISPR/Cas9介導(dǎo)的同源重組途徑成功驗證了在豬miR-17-92簇整合和表達外源基因以及制備基因修飾豬的潛力。首先,利用CRISPR/Cas9技術(shù)成功構(gòu)建了EGFP報告細胞系。通過CRISPR/Cas9介導(dǎo)的定點整合技術(shù),我們成功地將特異性抑制EGFP基因的shRNA精確整合至miR-17-92的3’UTR。在豬miR-17-92控制下插入的shRNA基因正常轉(zhuǎn)錄并有效抑制EGFP基因的表達。這表明豬miR-17-92允許外源基因整合和有效表達。在上述基礎(chǔ)上,我們通過篩選獲得了抗豬瘟病毒shRNA定點整合的豬胎兒成纖維細胞系。我們發(fā)現(xiàn)抗豬瘟病毒... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：121 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
英文縮寫詞表
前言
第一篇 文獻綜述
    第1章 基因編輯技術(shù)的研究進展
        1.1 ZFN技術(shù)
        1.2 TALEN技術(shù)
        1.3 CRISPR/Cas9技術(shù)
        1.4 基因修飾豬的應(yīng)用
    第2章 miR-17-92簇的研究進展
        2.1 miR-17-92簇的結(jié)構(gòu)和表達
        2.2 miR-17-92簇的調(diào)控
        2.3 miR-17-92簇的功能
        2.4 miR-17-92簇的前景
第二篇 研究內(nèi)容
    第1章 豬miR-17-92簇整合外源基因的可行性研究
        1.1 材料
        1.2 方法
        1.3 結(jié)果
        1.4 討論
        1.5 小結(jié)
    第2章 豬miR-17-92簇定點整合抗CSFV shRNA基因的研究
        2.1 材料
        2.2 方法
        2.3 結(jié)果
        2.4 討論
        2.5 小結(jié)
    第3章 基于豬miR-17-92簇制備抗PEDV shRNA基因修飾豬
        3.1 材料
        3.2 方法
        3.3 結(jié)果
        3.4 討論
        3.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
導(dǎo)師簡介
作者簡介及其在學(xué)期間所取得的科研成果
致謝



本文編號：3180211