[目的]基因編輯技術(shù)可調(diào)節(jié)多種細(xì)胞功能與特征,并可影響其向特定的方向分化。人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（human Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells,hUC-MSCs）分化過程受多種因素調(diào)節(jié)。本研究通過基因轉(zhuǎn)染技術(shù)在hUC-MSCs中過表達(dá)miR122、miR185,誘導(dǎo)hUC-MSCs肝向誘導(dǎo)分化后,檢測其肝細(xì)胞相關(guān)因子（AFP、ALB、CK18、CK19、HNF4α）的表達(dá)及細(xì)胞功能,研究二者單獨(dú)或協(xié)同作用對hUC-MSCs肝向分化的影響。[方法]1、hUC-MSCs細(xì)胞培養(yǎng)與鑒定:無菌條件下經(jīng)組織貼壁法分離培養(yǎng)hUC-MSCs,經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面特異分子CD34、CD45、CD90、CD105以及Oct-4的表達(dá)情況。對hUC-MSCs分別進(jìn)行成脂、成骨條件培養(yǎng)液誘導(dǎo)分化以對其多向分化潛能進(jìn)行鑒定。2、過表達(dá)miR122、miR185以及二者共同轉(zhuǎn)染hUC-MSCs的實(shí)驗(yàn):將鑒定合格的細(xì)胞進(jìn)行分組培養(yǎng),根據(jù)riboFECTM CP轉(zhuǎn)染試劑說明采用不同轉(zhuǎn)染濃度處理細(xì)胞,根據(jù)q-RT-PCR檢測過表達(dá)效果以及細(xì)胞轉(zhuǎn)染后細(xì)胞狀態(tài)確定miRNA轉(zhuǎn)染濃... 

【文章來源】：昆明醫(yī)科大學(xué)云南省

【文章頁數(shù)】：103 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
縮略詞表
中文摘要
英文摘要
前言
材料與方法
    1. 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 研究對象
        1.2 主要試驗(yàn)試劑
        1.3 主要試驗(yàn)儀器
        1.4 主要耗材
    2. 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)室常規(guī)溶液的配制
        2.2 hUC-MSCs的體外培養(yǎng)與鑒定
        2.3 miR122、miR185在hUC-MSCs內(nèi)過表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究
        2.4 miR122、miR185過表達(dá)對hUC-MSCs肝向分化影響的研究
        2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
結(jié)果
    1. hUC-MSCs的培養(yǎng)與鑒定結(jié)果
        1.1 hUC-MSCs的體外培養(yǎng)結(jié)果
        1.2 hUC-MSCs特異分子表達(dá)鑒定結(jié)果
        1.3 hUC-MSCs分化潛能鑒定結(jié)果
    2. miR122、miR185在hUC-MSCs內(nèi)過表達(dá)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.1 miR122、miR185過表達(dá)hUC-MSCs轉(zhuǎn)染濃度的確定
        2.2 miR122、miR185轉(zhuǎn)染hUC-MSCs其過表達(dá)效果的維持時(shí)長結(jié)果
        2.3 miR122、miR185過表達(dá)hUC-MSCs后細(xì)胞增殖情況
    3. miR122、miR185過表達(dá)對hUC-MSCs肝向誘導(dǎo)分化的影響
        3.1 miR122、miR185過表達(dá)hUC-MSCs肝向誘導(dǎo)分化后,肝特異蛋白mRNA的表達(dá)
        3.2 miR122、miR185過表達(dá)hUC-MSCs肝向誘導(dǎo)分化后,其肝特異蛋白的表達(dá)
        3.3 肝向誘導(dǎo)分化后細(xì)胞功能檢測結(jié)果
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    References
攻讀學(xué)位期間獲得的學(xué)術(shù)成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]MicroRNA-3963促進(jìn)小鼠間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化[J]. 劉偉江,李雪,劉元林,王鵬,樊月,滕天怡,白博乾,童越,張偉,張毅.  中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志. 2018(01)
[2]In vivo hepatic differentiation potential of human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells: Therapeutic effect on liver fibrosis/cirrhosis[J]. Guo-Zun Zhang,Hui-Cong Sun,Li-Bo Zheng,Jin-Bo Guo,Xiao-Lan Zhang.  World Journal of Gastroenterology. 2017(46)
[3]血管內(nèi)皮生長因子基因轉(zhuǎn)染的人脂肪干細(xì)胞具有較強(qiáng)的增殖和分化能力[J]. 陳猶白,張啟旭,Charles E.Butler,吳葉文,張麗萍,董江陵,韓巖.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2017(03)
[4]Use of bone morphogenetic proteins in mesenchymal stem cell stimulation of cartilage and bone repair[J]. Sonia Scarfì.  World Journal of Stem Cells. 2016(01)
[5]Mesenchymal stem cells from the human umbilical cord ameliorate fulminant hepatic failure and increase survival in mice[J]. Jin-Feng Yang,Hong-Cui Cao,Qiao-Ling Pan,Jiong Yu,Jun Li,Lan-Juan Li.  Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. 2015(02)
[6]Restoring the Treg cell to Th17 cell ratio may alleviate HBV-related acute-on-chronic liver failure[J]. Ying-Hua Niu,Dong-Lin Yin,Hong-Li Liu,Rui-Tian Yi,Yu-Cong Yang,Hong-An Xue,Tian-Yan Chen,Shu-Lin Zhang,Shu-Mei Lin,Ying-Ren Zhao.  World Journal of Gastroenterology. 2013(26)
[7]Hepatocytic differentiation of mesenchymal stem cells in cocultures with fetal liver cells[J]. Claudia Lange,Helge Bruns,Dietrich Kluth,Axel R Zander,Henning C Fiegel.  World Journal of Gastroenterology. 2006(15)



本文編號：3150307