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楊樹ERF轉(zhuǎn)錄因子RAP2L15基因RNAi植物表達(dá)載體的構(gòu)建及遺傳轉(zhuǎn)化

發(fā)布時間:2021-04-06 15:34
  ERF (ethylene response factor)轉(zhuǎn)錄因子是植物最大的特異性轉(zhuǎn)錄因子基因家族之一,在植物抗逆及生長發(fā)育方面起著重要作用。本研究從‘84K楊’(Populus abla×P.glandulosa)中克隆出ERF轉(zhuǎn)錄因子基因RAP2L15的全長cDNA序列,對其編碼的氨基酸序列進(jìn)行了同源性比對分析,并利用生物信息學(xué)對RAP2L15蛋白進(jìn)行理化性質(zhì)分析及結(jié)構(gòu)預(yù)測。結(jié)果表明, RAP2L15編碼的蛋白質(zhì)序列含有155個氨基酸,屬于不穩(wěn)定的親水蛋白,與楊樹耐鹽脅迫基因ERF38具有相似結(jié)構(gòu)。同源性序列比對分析表明RAP2L15與擬南芥ERF轉(zhuǎn)錄因子基因AtERF016具有較高同源性,推測該基因可能與植物耐鹽脅迫功能有關(guān)。構(gòu)建RAP2L15-RNAi抑制表達(dá)載體并利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)葉盤轉(zhuǎn)化法進(jìn)行楊樹遺傳轉(zhuǎn)化,獲得轉(zhuǎn)基因楊樹株系5個。本研究為進(jìn)一步探索RAP2L15轉(zhuǎn)錄因子基因在楊樹生長發(fā)育及抗鹽脅迫方面發(fā)揮的功能提供理論及材料基礎(chǔ)。 

【文章來源】:植物生理學(xué)報. 2020,56(12)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】:11 頁

【部分圖文】:

楊樹ERF轉(zhuǎn)錄因子RAP2L15基因RNAi植物表達(dá)載體的構(gòu)建及遺傳轉(zhuǎn)化


PCR鑒定結(jié)果

電泳圖,表達(dá)載體,轉(zhuǎn)基因


卡那霉素抗性株系繼代3代后,選擇40 d苗期的轉(zhuǎn)基因‘84K楊’和野生對照組‘84K楊’的第3~6片葉進(jìn)行DNA提取并進(jìn)行PCR擴(kuò)增。通過凝膠瓊脂糖電泳分析,對照組野生型‘84K楊’無目的條帶擴(kuò)增,RAP-2L15轉(zhuǎn)基因組在500 bp處條帶清晰,表明成功獲得ERF/RAP2L15-RNAi轉(zhuǎn)基因楊樹株系5個(圖12)。圖1 0 重組表達(dá)載體p ART27+p KANNIBAL-RAP2L15酶切電泳圖

電泳圖,表達(dá)載體,電泳圖


0 重組表達(dá)載體p ART27+p KANNIBAL-RAP2L15酶切電泳圖

【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]Plant abiotic stress response and nutrient use efficiency[J]. Zhizhong Gong,Liming Xiong,Huazhong Shi,Shuhua Yang,Luis R.Herrera-Estrella,Guohua Xu,Dai-Yin Chao,Jingrui Li,Peng-Yun Wang,Feng Qin,Jigang Li,Yanglin Ding,Yiting Shi,Yu Wang,Yongqing Yang,Yan Guo,Jian-Kang Zhu.  Science China(Life Sciences). 2020(05)
[2]擬南芥AtPAP1基因植物表達(dá)載體構(gòu)建及在煙草中遺傳轉(zhuǎn)化分析[J]. 劉軼,鄭唐春,代麗娟,劉彩霞,王慶娜,曲冠證.  植物生理學(xué)報. 2017(07)
[3]非生物脅迫相關(guān)NAC轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)及功能[J]. 李小蘭,胡玉鑫,楊星,于曉東,李秋莉.  植物生理學(xué)報. 2013(10)



本文編號:3121682

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