乳酰谷胱甘肽裂合酶（Lac）是降解生物體內(nèi)丙酮醛的重要酶之一。食品級微生物谷氨酸棒桿菌ATCC13032基因組上的NCgl0106預(yù)測為乳酰谷胱甘肽裂合酶基因,但尚缺乏實驗驗證。本試驗首先通過PCR技術(shù)擴增出預(yù)測的谷氨酸棒狀桿菌ATCC13032乳酰谷胱甘肽裂合酶基因lac,并將之與表達載體pET-28a連接,轉(zhuǎn)化BL21（DE3）感受態(tài)細胞,成功獲得工程菌E.coli BL21（DE3）/pET-28a-lac。然后,使用IPTG誘導(dǎo)E.coli BL21（DE3）/pET-28a-lac表達重組蛋白乳酰谷胱甘肽裂合酶。SDS-PAGE試驗結(jié)果表明:重組乳酰谷胱甘肽裂合酶蛋白在大腸桿菌進行了可溶性表達,其分子量約為14kDa。最后,對重組乳酰谷胱甘肽裂合酶蛋白進行了分離純化、活性檢測及酶學(xué)特性分析。應(yīng)用His-tag純化獲得的重組蛋白溶液濃度為604.9μg/mL;活性檢測顯示重組乳酰谷胱甘肽裂合酶蛋白能催化丙酮醛和谷胱甘肽生成S-D-乳酰谷胱甘肽,表明谷氨酸棒桿菌NCgl0106是乳酰谷胱甘肽裂合酶基因;酶學(xué)特性分析表明重組乳酰谷胱甘肽裂合酶的最適反應(yīng)溫度為60℃,最適反應(yīng)pH為7... 

【文章來源】：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)河北省

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

GAPDH的催化過程

乳酰谷胱甘肽裂合酶基因000；1 為乳酰谷胱甘肽裂horesis map of lactoylglu構(gòu)建谷胱甘肽裂合酶基接。 轉(zhuǎn)化入大腸桿性的 LB 平板上篩選，酶切產(chǎn)物在 536T-28a-lac。

28a-lac 重組表達載體構(gòu)建的雙酶切L2000；1 為 pET28a-lac 的 NcoI 和 of double enzyme digestion of the re0; 1: digested products of pET28a-lac酶蛋白濃度及丙酮醛標準曲線測分光光度儀測定相應(yīng)濃度的標白溶液濃度。測得 3 個標準組肽裂合酶蛋白溶液的吸光值為谷胱甘肽裂合酶蛋白溶液濃度

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3120662