UVB致HaCaT細胞損傷中SIRT3相關(guān)研究
發(fā)布時間：2021-04-01 12:32
背景目的:中波紫外線（UVB）的過度暴露會損傷各種生物大分子,誘導炎癥反應,抑制增殖和促進細胞衰老與死亡。UVB是太陽光中紫外線致癌的主要因素。皮膚是人體最大的器官,也是最易遭受UVB損傷的器官。UVB的穿透力弱,僅能到達表皮層,因此相關(guān)研究主要采用占表皮細胞主體的角質(zhì)形成細胞。UVB致角質(zhì)形成細胞的各種損傷多與活性氧（ROS）蓄積導致的氧化應激密切相關(guān)。細胞中90%的ROS來自于線粒體,同時線粒體也是ROS清除的主要場所。線粒體中的多種酶參與ROS的清除,包含超氧化物歧化酶2（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（Glutathione peroxidase,GSH-Px）和過氧化氫酶（catalase）等。正常生理條件下,ROS的水平會維持在極低有利無害的水平。角質(zhì)形成細胞被UVB照射會引起細胞內(nèi)ROS水平顯著增加,這與線粒體中抗氧化酶活性的下降密切相關(guān)。乙�；揎検怯绊懢�粒體中抗氧化酶活性的主要方式,定位在線粒體的去乙�；窼IRT3在角質(zhì)形成細胞中的研究很少。本研究選用HaCaT這種UVB照射對表皮角質(zhì)細胞的影響相關(guān)研究的成熟的體外模型。采用q...
【文章來源】：大連醫(yī)科大學遼寧省
【文章頁數(shù)】：50 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
UVB對SIRT3表達的影響A.UVB
大連醫(yī)科大學碩士學位論文222.UVB照射后HaCaT細胞中ROS水平升高和SOD2表達降低UVB照射后對HaCaT細胞多種生物學過程的影響都與氧化應激有關(guān)。目前，氧化應激的檢測指標主要有ROS水平、抗氧化酶表達和活性、抗氧化物如GSH、脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物等。本研究中首先采用DHE法通過熒光顯微鏡（圖2A）和熒光酶標儀（圖2B）測定了UVB照射后細胞中ROS的水平。發(fā)現(xiàn)，HaCaT細胞ROS水平均被30mJ/cm2和120mJ/cm2劑量的UVB照射后升高，而且120mJ/cm2劑量升高更顯著。接下來檢測了抗氧化酶SOD2蛋白的表達，發(fā)現(xiàn)這兩個照射劑量均下調(diào)了SOD2的水平，120mJ/cm2UVB被下調(diào)得更為顯著（圖2C）。ABC圖2.UVB照射對HaCaT細胞ROS的影響A.熒光顯微鏡觀察（200X）B.熒光酶標儀測定C.WesternBlot結(jié)果顯示UVB照射后SOD2蛋白表達(*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001)3.UVB照射抑制HaCaT細胞遷移能力上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）是與遷移密切相關(guān)的一種表型改變，在胚胎發(fā)育、器官的細胞更新和再生，以及多功能干細胞的分化等過程均發(fā)揮重要的生理作用。通過EMT，上皮細胞失去細胞極性和與基底膜的連接，獲得較高的遷移與侵襲能力。我們采用劃痕實驗檢測了UVB照射對HaCaT細胞遷移能力的影響。30mJ/cm2UVB照射未把細胞遷移明顯減慢，HaCaT細胞被120mJ/cm2劑量UVB照射后遷移被顯
大連醫(yī)科大學碩士學位論文23A處CD著抑制（圖3A）。Westernblot結(jié)果顯示被120mJ/cm2劑量UVB照射后遷移相關(guān)的Twist蛋白表達下降，30mJ/cm2劑量UVB照射后沒有改變Twist的表達（圖3B）。照射后細胞增殖未被30mJ/cm2UVB明顯抑制，120mJ/cm2劑量UVB照射后HaCaT細胞增殖被顯著抑制（圖3C-D）。B圖3.UVB對HaCaT細胞遷移能力的影響.A.倒置顯微鏡下觀察UVB照射前后HaCaT細胞劃痕實驗結(jié)果（100X）B.UVB照射后Twist蛋白表達C.倒置顯微鏡觀察不同劑量UVB照射對HaCaT細胞生長的影響（100X）D.CCK-8法檢測UVB對HaCaT細胞活力的影響(*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001)4.SIRT3過表達減弱了UVB損傷作用為探討線粒體SIRT3對UVB致氧化應激的影響，我們檢測了SIRT3過表達對高劑量UVB照射損傷作用的影響。SIRT3過表達（圖4A）能下調(diào)120mJ/cm2UVB照射引起的ROS水平增高（圖4B，4C）和SOD2蛋白水平的下降（圖4D）。同時在一定程度上逆轉(zhuǎn)了UVB對細胞遷移和增殖能力的下調(diào)（圖4E-G）。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]Mutual interaction between oxidative stress and endoplasmic reticulum stress in the pathogenesis of diseases specifically focusing on non-alcoholic fatty liver disease[J]. Junichi Fujii,Takujiro Homma,Sho Kobayashi,Han Geuk Seo. World Journal of Biological Chemistry. 2018(01)
本文編號：3113340
【文章來源】：大連醫(yī)科大學遼寧省
【文章頁數(shù)】：50 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
UVB對SIRT3表達的影響A.UVB
大連醫(yī)科大學碩士學位論文222.UVB照射后HaCaT細胞中ROS水平升高和SOD2表達降低UVB照射后對HaCaT細胞多種生物學過程的影響都與氧化應激有關(guān)。目前，氧化應激的檢測指標主要有ROS水平、抗氧化酶表達和活性、抗氧化物如GSH、脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物等。本研究中首先采用DHE法通過熒光顯微鏡（圖2A）和熒光酶標儀（圖2B）測定了UVB照射后細胞中ROS的水平。發(fā)現(xiàn)，HaCaT細胞ROS水平均被30mJ/cm2和120mJ/cm2劑量的UVB照射后升高，而且120mJ/cm2劑量升高更顯著。接下來檢測了抗氧化酶SOD2蛋白的表達，發(fā)現(xiàn)這兩個照射劑量均下調(diào)了SOD2的水平，120mJ/cm2UVB被下調(diào)得更為顯著（圖2C）。ABC圖2.UVB照射對HaCaT細胞ROS的影響A.熒光顯微鏡觀察（200X）B.熒光酶標儀測定C.WesternBlot結(jié)果顯示UVB照射后SOD2蛋白表達(*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001)3.UVB照射抑制HaCaT細胞遷移能力上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）是與遷移密切相關(guān)的一種表型改變，在胚胎發(fā)育、器官的細胞更新和再生，以及多功能干細胞的分化等過程均發(fā)揮重要的生理作用。通過EMT，上皮細胞失去細胞極性和與基底膜的連接，獲得較高的遷移與侵襲能力。我們采用劃痕實驗檢測了UVB照射對HaCaT細胞遷移能力的影響。30mJ/cm2UVB照射未把細胞遷移明顯減慢，HaCaT細胞被120mJ/cm2劑量UVB照射后遷移被顯
大連醫(yī)科大學碩士學位論文23A處CD著抑制（圖3A）。Westernblot結(jié)果顯示被120mJ/cm2劑量UVB照射后遷移相關(guān)的Twist蛋白表達下降，30mJ/cm2劑量UVB照射后沒有改變Twist的表達（圖3B）。照射后細胞增殖未被30mJ/cm2UVB明顯抑制，120mJ/cm2劑量UVB照射后HaCaT細胞增殖被顯著抑制（圖3C-D）。B圖3.UVB對HaCaT細胞遷移能力的影響.A.倒置顯微鏡下觀察UVB照射前后HaCaT細胞劃痕實驗結(jié)果（100X）B.UVB照射后Twist蛋白表達C.倒置顯微鏡觀察不同劑量UVB照射對HaCaT細胞生長的影響（100X）D.CCK-8法檢測UVB對HaCaT細胞活力的影響(*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001)4.SIRT3過表達減弱了UVB損傷作用為探討線粒體SIRT3對UVB致氧化應激的影響，我們檢測了SIRT3過表達對高劑量UVB照射損傷作用的影響。SIRT3過表達（圖4A）能下調(diào)120mJ/cm2UVB照射引起的ROS水平增高（圖4B，4C）和SOD2蛋白水平的下降（圖4D）。同時在一定程度上逆轉(zhuǎn)了UVB對細胞遷移和增殖能力的下調(diào)（圖4E-G）。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]Mutual interaction between oxidative stress and endoplasmic reticulum stress in the pathogenesis of diseases specifically focusing on non-alcoholic fatty liver disease[J]. Junichi Fujii,Takujiro Homma,Sho Kobayashi,Han Geuk Seo. World Journal of Biological Chemistry. 2018(01)
本文編號：3113340
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