背景目的:中波紫外線（UVB）的過(guò)度暴露會(huì)損傷各種生物大分子,誘導(dǎo)炎癥反應(yīng),抑制增殖和促進(jìn)細(xì)胞衰老與死亡。UVB是太陽(yáng)光中紫外線致癌的主要因素。皮膚是人體最大的器官,也是最易遭受UVB損傷的器官。UVB的穿透力弱,僅能到達(dá)表皮層,因此相關(guān)研究主要采用占表皮細(xì)胞主體的角質(zhì)形成細(xì)胞。UVB致角質(zhì)形成細(xì)胞的各種損傷多與活性氧（ROS）蓄積導(dǎo)致的氧化應(yīng)激密切相關(guān)。細(xì)胞中90%的ROS來(lái)自于線粒體,同時(shí)線粒體也是ROS清除的主要場(chǎng)所。線粒體中的多種酶參與ROS的清除,包含超氧化物歧化酶2（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（Glutathione peroxidase,GSH-Px）和過(guò)氧化氫酶（catalase）等。正常生理?xiàng)l件下,ROS的水平會(huì)維持在極低有利無(wú)害的水平。角質(zhì)形成細(xì)胞被UVB照射會(huì)引起細(xì)胞內(nèi)ROS水平顯著增加,這與線粒體中抗氧化酶活性的下降密切相關(guān)。乙�；揎検怯绊懢�粒體中抗氧化酶活性的主要方式,定位在線粒體的去乙�；窼IRT3在角質(zhì)形成細(xì)胞中的研究很少。本研究選用HaCaT這種UVB照射對(duì)表皮角質(zhì)細(xì)胞的影響相關(guān)研究的成熟的體外模型。采用q... 

【文章來(lái)源】：大連醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：50 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

UVB對(duì)SIRT3表達(dá)的影響A.UVB

大連醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文222.UVB照射后HaCaT細(xì)胞中ROS水平升高和SOD2表達(dá)降低UVB照射后對(duì)HaCaT細(xì)胞多種生物學(xué)過(guò)程的影響都與氧化應(yīng)激有關(guān)。目前，氧化應(yīng)激的檢測(cè)指標(biāo)主要有ROS水平、抗氧化酶表達(dá)和活性、抗氧化物如GSH、脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物等。本研究中首先采用DHE法通過(guò)熒光顯微鏡（圖2A）和熒光酶標(biāo)儀（圖2B）測(cè)定了UVB照射后細(xì)胞中ROS的水平。發(fā)現(xiàn)，HaCaT細(xì)胞ROS水平均被30mJ/cm2和120mJ/cm2劑量的UVB照射后升高，而且120mJ/cm2劑量升高更顯著。接下來(lái)檢測(cè)了抗氧化酶SOD2蛋白的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)這兩個(gè)照射劑量均下調(diào)了SOD2的水平，120mJ/cm2UVB被下調(diào)得更為顯著（圖2C）。ABC圖2.UVB照射對(duì)HaCaT細(xì)胞ROS的影響A.熒光顯微鏡觀察（200X）B.熒光酶標(biāo)儀測(cè)定C.WesternBlot結(jié)果顯示UVB照射后SOD2蛋白表達(dá)(*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001)3.UVB照射抑制HaCaT細(xì)胞遷移能力上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）是與遷移密切相關(guān)的一種表型改變，在胚胎發(fā)育、器官的細(xì)胞更新和再生，以及多功能干細(xì)胞的分化等過(guò)程均發(fā)揮重要的生理作用。通過(guò)EMT，上皮細(xì)胞失去細(xì)胞極性和與基底膜的連接，獲得較高的遷移與侵襲能力。我們采用劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了UVB照射對(duì)HaCaT細(xì)胞遷移能力的影響。30mJ/cm2UVB照射未把細(xì)胞遷移明顯減慢，HaCaT細(xì)胞被120mJ/cm2劑量UVB照射后遷移被顯

大連醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文23A處CD著抑制（圖3A）。Westernblot結(jié)果顯示被120mJ/cm2劑量UVB照射后遷移相關(guān)的Twist蛋白表達(dá)下降，30mJ/cm2劑量UVB照射后沒(méi)有改變Twist的表達(dá)（圖3B）。照射后細(xì)胞增殖未被30mJ/cm2UVB明顯抑制，120mJ/cm2劑量UVB照射后HaCaT細(xì)胞增殖被顯著抑制（圖3C-D）。B圖3.UVB對(duì)HaCaT細(xì)胞遷移能力的影響.A.倒置顯微鏡下觀察UVB照射前后HaCaT細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果（100X）B.UVB照射后Twist蛋白表達(dá)C.倒置顯微鏡觀察不同劑量UVB照射對(duì)HaCaT細(xì)胞生長(zhǎng)的影響（100X）D.CCK-8法檢測(cè)UVB對(duì)HaCaT細(xì)胞活力的影響(*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001)4.SIRT3過(guò)表達(dá)減弱了UVB損傷作用為探討線粒體SIRT3對(duì)UVB致氧化應(yīng)激的影響，我們檢測(cè)了SIRT3過(guò)表達(dá)對(duì)高劑量UVB照射損傷作用的影響。SIRT3過(guò)表達(dá)（圖4A）能下調(diào)120mJ/cm2UVB照射引起的ROS水平增高（圖4B，4C）和SOD2蛋白水平的下降（圖4D）。同時(shí)在一定程度上逆轉(zhuǎn)了UVB對(duì)細(xì)胞遷移和增殖能力的下調(diào)（圖4E-G）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Mutual interaction between oxidative stress and endoplasmic reticulum stress in the pathogenesis of diseases specifically focusing on non-alcoholic fatty liver disease[J]. Junichi Fujii,Takujiro Homma,Sho Kobayashi,Han Geuk Seo.  World Journal of Biological Chemistry. 2018(01)



本文編號(hào)：3113340