ACYL-ACYL CARRYIER PROTEIN DESATURASEs（AADs）在植物細(xì)胞中特異地催化硬脂酸（C18:0）轉(zhuǎn)化為油酸（C18:1）。前人的研究表明,AAD在擬南芥中共有7個(gè)成員,它們分別為:AtSSI2、AtAAD1、AtAAD2、AtAAD3、AtAAD4、AtAAD5和AtAAD6。除AtAAD5外,擬南芥其他AAD家族成員在脂肪酸積累及抗逆境脅迫等方面的功能均已有較為深入的研究。此外,油菜中AAD5基因的功能仍不清楚。鑒于此,本文首先研究了AtAAD5在擬南芥中的時(shí)空表達(dá)模式以及對(duì)種子脂肪酸積累的影響;利用生物信息學(xué)方法分析比較了AAD5在十字花科植物及主要油料作物中的親緣關(guān)系;從甘藍(lán)型油菜自交系品種L111中克隆了與AtAAD5序列親緣關(guān)系最相近的BnAAD5-1基因的全長(zhǎng)編碼區(qū),構(gòu)建了其過表達(dá)載體并成功轉(zhuǎn)入對(duì)應(yīng)的擬南芥突變體aad5-2中,獲得aad5-2 35S:BnAAD5-1純合轉(zhuǎn)基因株系。在此基礎(chǔ)上,我們分析比較了AtAAD5及BnAAD5-1在種子脂肪酸合成積累方面的功能。本研究獲得的主要研究結(jié)果如下:（1）構(gòu)建了pAtAAD5:GUS載體并... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

擬南芥種子發(fā)育過程示意圖（引自Baudetal.2008）

圖 2.1 本試驗(yàn)構(gòu)建的兩種質(zhì)粒載體示意圖Figure 2.1 Schematic diagram of two plasmid constructed in this experiment如圖 2.1 所示為本研究中構(gòu)建的兩個(gè)質(zhì)粒載體的結(jié)構(gòu)示意圖。圖 2.1 A 為pAtAAD5:GUS 載體示意圖，利用限制性內(nèi)切酶 Hind III 和 Xma I 將 AtAAD5 基因啟動(dòng)子連在質(zhì)粒中 GUS 基因之前，可以在 AtAAD5 基因本身特定的組織時(shí)期表達(dá) GUS 基因，方便我們檢測(cè)；圖 2.1 B 為過表達(dá)載體示意圖，利用 Xma I 和 Spe I 內(nèi)切酶將 BnAAD5-1基因連入過表達(dá)質(zhì)粒載體中，轉(zhuǎn)化入植物中后可以在擬南芥各個(gè)組織時(shí)期過量表達(dá)。兩種雙元質(zhì)粒載體均帶有卡那抗性和 Basta 抗性基因以便于篩選。2.5.3.1 PCR 擴(kuò)增AtAAD5 基因啟動(dòng)子的 PCR 擴(kuò)增：用前文表 1 中給出的引物克隆 AtAAD5 啟動(dòng)子和BnAAD5-1 基因 CDS，分別以的擬南芥 Col-0 野生型 Genomic DNA 和甘藍(lán)型油菜 L111自交系 cDNA 作為模板克隆目標(biāo)序列基因。本試驗(yàn)使用 Takara 公司 PrimerStar Taq 高保真酶進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增。

第二章 材料與方法第三章 結(jié)果與分析 AtAAD5 基因的表達(dá)模式分析前人研究表明 AtAAD5 基因在擬南芥各個(gè)組織包括根、莖、葉片、花、角果中廣（Kachroo et al. 2007），為了進(jìn)一步驗(yàn)證該基因在野生型擬南芥中的時(shí)空表達(dá)模構(gòu)建了 pAtAAD5:GUS 載體并成功轉(zhuǎn)化入擬南芥野生型 Col-0 中，共獲得 19 個(gè)AD5:GUS 轉(zhuǎn)基因株系。采集轉(zhuǎn)基因株系中發(fā)芽的幼苗、蓮座葉、莖生葉、花、莢果以及發(fā)育成熟各個(gè)時(shí)期的種子等組織材料，利用 X-Gluc 溶液進(jìn)行著色后表且不同株系間表型基本相同，故選取其中最典型的一個(gè)株系作為展示分析，如圖示。A B C D

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]多不飽和脂肪酸對(duì)動(dòng)物脂類代謝的調(diào)節(jié)作用與機(jī)制[J]. 王雪,閆素梅.  動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào). 2019(06)
[2]嬰幼兒配方食品中添加長(zhǎng)鏈多不飽和脂肪酸的健康效益:系統(tǒng)綜述[J]. 房愛萍,陳偲,韓軍花,朱惠蓮.  營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào). 2018(06)
[3]油菜育種行業(yè)創(chuàng)新動(dòng)態(tài)與發(fā)展趨勢(shì)[J]. 范成明,田建華,胡贊民,王玨,呂慧穎,葛毅強(qiáng),魏珣,鄧向東,張蕾穎,楊維才.  植物遺傳資源學(xué)報(bào). 2018(03)
[4]我國(guó)油菜產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀、發(fā)展困境及建議[J]. 劉成,黃杰,冷博峰,馮中朝,李俊鵬.  中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2017(12)
[5]我國(guó)白菜型冬油菜與甘藍(lán)型冬油菜抗寒性研究進(jìn)展[J]. 羅斌,趙衛(wèi)國(guó),李保軍,趙亞軍,朱彥濤,王灝.  陜西農(nóng)業(yè)科學(xué). 2017(09)
[6]雙低菜籽油的保健作用與高含油量?jī)?yōu)質(zhì)油菜育種及高效益思考[J]. 李殿榮,陳文杰,于修燭,王灝,任軍榮,張耀文.  中國(guó)油料作物學(xué)報(bào). 2016(06)
[7]勞動(dòng)力轉(zhuǎn)移損害了油菜生產(chǎn)嗎?——基于要素產(chǎn)出彈性和替代彈性的實(shí)證[J]. 李谷成,梁玲,尹朝靜,馮中朝.  華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(社會(huì)科學(xué)版). 2015(01)
[8]近十三年我國(guó)冬油菜新品種單產(chǎn)與含油量的變化分析[J]. 李殿榮,鄭磊,李少欽.  種子. 2014(02)
[9]中國(guó)植物油產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀、問題及對(duì)策研究[J]. 周振亞,李建平,張晴,羅其友.  中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào). 2011(32)
[10]油脂中脂肪酸成分與人體健康[J]. 王華志,王道波,李秋霖,王鳳玲,熊素敏.  糧油加工. 2010(06)

博士論文
[1]甘藍(lán)型油菜及其親本物種TTG1和TT18基因家族的克隆與比較基因組學(xué)研究[D]. 呂俊.西南大學(xué) 2009



本文編號(hào)：3111473