腎上腺是人體重要的內(nèi)分泌器官。由于缺乏腎上腺皮質(zhì)束狀帶特異性表達(dá)Cre酶的工具鼠,目前對(duì)腎上腺皮質(zhì)束狀帶細(xì)胞中特異表達(dá)基因的功能缺乏深入的解析。CYP11B1基因編碼類固醇11β-羥化酶,該酶是糖皮質(zhì)激素合成的關(guān)鍵酶,在腎上腺皮質(zhì)束狀帶中特異性表達(dá)。本研究旨在利用CYP11B1基因在束狀帶特異性表達(dá)的特點(diǎn),構(gòu)建在腎上腺皮質(zhì)束狀帶中特異性表達(dá)Cre重組酶的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。采用CRISPR/Cas9技術(shù)在CYP11B1基因終止密碼子位點(diǎn)定點(diǎn)敲入2A-GfpCre表達(dá)框,獲得CYP11B1-2A-GfpCre同源重組載體,進(jìn)而構(gòu)建CYP11B1Cre小鼠,并通過mTmG和LacZ染色確定Cre酶主要表達(dá)在小鼠腎上腺皮質(zhì)束狀帶。在此基礎(chǔ)上,本研究還用該工具鼠與胱硫醚-γ-裂解酶（cystathionineγ-lyase, CTH）條件性敲除鼠交配,獲得了腎上腺皮質(zhì)束狀帶CTH特異性敲除的小鼠,并證實(shí)了該動(dòng)物腎上腺皮質(zhì)束狀帶中CTH表達(dá)缺失。以上結(jié)果充分說明腎上腺皮質(zhì)束狀帶特異性表達(dá)Cre重組酶小鼠構(gòu)建成功。該工具鼠的成功構(gòu)建,為深入研究腎上腺皮質(zhì)束狀帶相關(guān)功能提供了有力工具。 

【文章來源】：生理學(xué)報(bào). 2020,72(02)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：9 頁

【部分圖文】：

CYP11B1蛋白在小鼠腎上腺組織的分布

Cre工具小鼠主要用于和不同基因的flox小鼠交配，以獲得某種基因在特定組織中敲除或敲低的動(dòng)物[30–33]。本研究組以往的研究表明，小鼠腎上腺皮質(zhì)表達(dá)CTH基因及其蛋白[5]。本研究將CTHf/f小鼠與CYP11B1Cre鼠交配，通過基因鑒定獲得CTHf/f/CYP11B1Cre和CTH/f/CYP11B1Cre小鼠，并用Western blot方法檢測(cè)了這兩種小鼠心、肝、脾、肺、腎和腎上腺組織中CTH表達(dá)，結(jié)果如圖5所示，在CTHf/f/CYP11B1Cre小鼠腎上腺組織中未檢測(cè)到CTH蛋白，而心、肝、脾、肺、腎組織中仍然有CTH表達(dá)。圖4.CYP11B1Cre小鼠與LacZ工具鼠交配獲得的Cre及LacZ雙陽性小鼠各組織β-gal著色

圖3.CYP11B1Cre小鼠與mTmG工具鼠交配獲得的Cre及mTmG雙陽性小鼠各組織中mTmG的表達(dá)圖5.胱硫醚-γ-裂解酶(CTH)在不同基因型小鼠多種組織中的蛋白表達(dá)水平


本文編號(hào)：3097642