目的:以小鼠睪丸組織c DNA文庫為模板,利用RT-PCR技術(shù)成功地克隆出了一個在小鼠睪丸組織中特異性高表達的與生精細胞凋亡相關(guān)的新基因LRRC34。方法:經(jīng)生物信息學分析,該基因定位于小鼠3號染色體的3A和3B之間,并且含有11個外顯子,10個內(nèi)含子。其c DNA全長序列為1 840 bp,開放閱讀框為1 248 bp,編碼一個含有415個氨基酸殘基的蛋白質(zhì)。結(jié)果:多組織RT-PCR結(jié)果表明,該基因僅在小鼠睪丸組織中特異性表達,因此推測其可能在睪丸發(fā)育和精子形成的過程中起重要作用。結(jié)論:本基因的克隆為后續(xù)LRRC34基因功能的研究奠定了良好的基礎(chǔ),為男性生殖方面相關(guān)疾病提供了一定的理論依據(jù)。 

【文章來源】：生物化工. 2020,6(01)

【文章頁數(shù)】：4 頁

【部分圖文】：

RT-PCR檢測小鼠多組織cDNA第一鏈

通過改變退火溫度進行最佳條件的探索，得到該基因的最佳退火溫度為62℃，在最佳PCR克隆條件下對LRRC34基因進行PCR擴增（如圖2示）。從圖2中可看到，小鼠睪丸組織擴增出特異性產(chǎn)物，且基因片段長度在1 000～2 000 bp之間，這與LRRC34基因預(yù)期片段長度1 557 bp大體相符，說明該基因確實在小鼠睪丸組織中有表達，LRRC34基因被成功地擴增。將克隆產(chǎn)物連接到p MD18-T Vector Kit載體上，經(jīng)測序，結(jié)果與序列完全一致，說明拼接序列是正確的。然后將含有LRRC34基因T載體的E.coli Top10菌液培養(yǎng)，抽質(zhì)粒保存在超低溫冰箱用于做后續(xù)實驗。2.4 基因LRRC34在小鼠不同組織中的表達水平

以逆轉(zhuǎn)錄合成的小鼠多組織cDNA第一鏈為模板，用LRRC34的設(shè)計的引物作為引物，使用Taq DNA聚合酶進行PCR擴增LRRC34基因（如圖3示）。從圖3可看到，LRRC34基因僅在小鼠睪丸組織中有表達，而在小鼠其他組織中均不表達，從這一點說明LRRC34基因具有組織特異性，故而可以推斷LRRC34基因是睪丸特異表達基因。3 討論

【參考文獻】：
期刊論文
[1]男性不育基礎(chǔ)研究的現(xiàn)狀及可能性途徑[J]. 丁之德.  中國男科學雜志. 2010(03)
[2]小鼠生精細胞凋亡相關(guān)基因的分子克隆[J]. 姜宏,李麓蕓,盧光琇.  生物化學與生物物理學報. 2001(04)
[3]小鼠雄性生殖細胞生后發(fā)育中的程序性死亡[J]. 王瑞安,小路武彥,鄭平菊,張遠強,中根一穗.  解剖學報. 1998(04)

碩士論文
[1]睪丸特異表達新基因Spata34和Mage-k1的克隆及蛋白表達和分離純化[D]. 陳宏波.湖南理工學院 2017
[2]小鼠新基因Dnajc5b的克隆表達及Rcet1敲除后表型的檢測研究[D]. 徐帥.湖南理工學院 2017



本文編號：3089676