crustin是對蝦中重要的抗菌肽,本研究獲得的carcinin Pm3屬于斑節(jié)對蝦crustin家族,是一種新型抗菌肽,成熟肽含有92個氨基酸,與其他對蝦抗菌肽的同源性小于45%.根據(jù)其氨基酸序列和大腸桿菌（Escherichia coli,E. coli）的密碼子偏好性設(shè)計carcinin Pm3的基因序列,將carcinin Pm3連接到原核表達載體pSmartI-SUMO上,構(gòu)建重組表達載體p SmartI-SUMO-carcinin Pm3,再轉(zhuǎn)化至原核表達菌株E. coli BL21 （DE3）中,通過異丙基-β-D-硫代半乳糖苷（isopropylβ-D-thiogalactopyranoside,IPTG）誘導SUMOcarcinin Pm3的融合表達,進一步優(yōu)化其表達條件,獲得表達量大、可溶性高的重組蛋白.通過親和層析純化得到重組蛋白,蛋白的質(zhì)量濃度達到195μg/m L.利用SUMO酶去除SUMO融合標簽,獲得沒有外源標簽的carcinin Pm3抗菌肽,可用于蛋白功能分析、抗體制備等研究.研究結(jié)果為carcinin Pm3功能的分析及應(yīng)用提供參考. 

【文章來源】：深圳大學學報(理工版). 2020,37(01)北大核心

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【部分圖文】：

重組質(zhì)粒的構(gòu)建

將正確的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入E.coli BL21(DE3)進行表達，并對carcinin Pm3的可溶性進行檢測，結(jié)果如圖2．由圖2可見，誘導6 h后融合蛋白carcinin Pm3得以正常表達，分子質(zhì)量約為25 k Da，并且存在于上清中，表明融合蛋白carcinin Pm3是可溶性蛋白．2.3 獲得carcinin Pm3最優(yōu)表達條件

圖3為carcinin Pm3原核表達及可溶性分析結(jié)果．由圖3可見，在1 mmol/L的IPTG誘導下，融合蛋白carcinin Pm3的表達量逐漸增大，6 h及之后的表達量接近．圖4的電泳結(jié)果顯示，在不同終濃度IPTG條件下誘導6 h,0.2、0.8和1.0 mmol/L誘導蛋白的表達量相差不大，又因IPTG具有毒性，會危害表達宿主，所以選擇IPTG終濃度為0.2mmol/L．因此，可確定融合蛋白carcinin Pm3的在IPTG終濃度為0.2 mmol/L條件下誘導6 h表達量最大．圖4 carcinin Pm3原核表達的IPTG濃度優(yōu)化

【參考文獻】：
期刊論文
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