基因瞬時表達(dá)是植物中研究目標(biāo)基因功能的常用手段。在模式植物擬南芥（Arabidopsis thaliana）中,相比原生質(zhì)體和農(nóng)桿菌介導(dǎo)的基因異源表達(dá)技術(shù),利用粒子轟擊進(jìn)行基因瞬時表達(dá)一直鮮有報道。其主要原因是擬南芥葉型相對較小、基因槍操作相對煩瑣以及基因表達(dá)效率差異較大。該研究通過優(yōu)化雙管基因槍系統(tǒng),在營養(yǎng)生長旺盛的擬南芥蓮座葉中實現(xiàn)GFP和GUS基因高效表達(dá)。同時,通過GUS報告基因明確了壞死誘導(dǎo)因子BAX、Avh238和ATR13/Rpp13激發(fā)擬南芥細(xì)胞壞死的表型。但在本氏煙（Nicotianabenthamiana）中明顯誘導(dǎo)細(xì)胞壞死的Avrblb1/RB基因?qū)?在擬南芥中卻喪失了誘導(dǎo)細(xì)胞壞死的活性。由于雙管基因槍系統(tǒng)每次轟擊時設(shè)置平行對照,可有效降低轉(zhuǎn)化實驗中的樣本變異度,為擬南芥及其突變體研究中準(zhǔn)確評價基因功能和高通量篩選目標(biāo)基因提供新的技術(shù)參考。 

【文章來源】：植物學(xué)報. 2020,55(02)北大核心

【文章頁數(shù)】：10 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 植物材料
        1.1.2 質(zhì)粒材料
    1.2 方法
        1.2.1 基因槍微粒子彈制備及雙孔槍頭的組裝和轟擊參數(shù)設(shè)置
        1.2.2 轟擊轉(zhuǎn)化
        1.2.3 報告基因的檢測與觀察
        1.2.4 雙管基因槍轉(zhuǎn)化結(jié)果統(tǒng)計分析
        1.2.5 本氏煙中農(nóng)桿菌介導(dǎo)的基因瞬時表達(dá)
        1.2.6 轉(zhuǎn)基因擬南芥的制備與檢測
2 結(jié)果與討論
    2.1 擬南芥中雙管基因槍介導(dǎo)報告基因的瞬時表達(dá)
    2.2 雙管基因槍可有效降低樣本的變異度
    2.3 擬南芥葉片中應(yīng)用雙管基因槍介導(dǎo)瞬時表達(dá)測定效應(yīng)基因功能
    2.4 討論



本文編號：3071712