篤斯越桔（Vaccinium uliginosum Linn.）是長白山苔原帶的優(yōu)勢植被之一,因其生長在海拔2000—2500m的高山環(huán)境條件下,生長季節(jié)短,一年內(nèi)大部分時間生長在寒冷或積雪環(huán)境條件下。根據(jù)達爾文的“適者生存”的進化機制,篤斯越桔在長白山高山苔原帶的逆境條件下一定擁有其內(nèi)在抗逆適應機制。作為植物體內(nèi)無所不在的共生物,內(nèi)生真菌在篤斯越桔的適應進化過程中一定起著非常重要的作用。因受長白山自然保護區(qū)嚴格生物多樣性保護管理措施的限制,長白山苔原帶篤斯越桔內(nèi)生真菌還未見有系統(tǒng)的研究報道。作為長白山森林生態(tài)系統(tǒng)的重要組成部分,植物內(nèi)生真菌的功能還未得到深入闡述。另外,隨著越來越多的植物內(nèi)生真菌的藥用代謝產(chǎn)物資源的發(fā)現(xiàn),對特殊生境下的篤斯越桔內(nèi)生真菌的研究則更有現(xiàn)實研究意義。因此,本文于2018和2019年的生長季節(jié)對長白山苔原篤斯越桔進行了植株樣品采集,并利用組織學分離鑒定技術和高通量測序技術相結合的方法,對不同時期、不同海拔的長白山苔原帶篤斯越桔不同組織部位的內(nèi)生真菌多樣性進行了調(diào)查分析。此外,篤斯越桔中可分離出大量有效活性成分。鑒于內(nèi)生真菌通過發(fā)酵等方式可產(chǎn)與寄主植物相同或相似... 

【文章來源】：遼寧師范大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

菌株基因組DNA電泳檢測圖

長白山苔原帶篤斯越桔內(nèi)生真菌的多樣性及其代謝產(chǎn)物的研究15圖2.2宏基因組文庫的構建Fig.2.2Metagenomiclibraryconstructionprocess2.2.6內(nèi)生真菌多樣性高通量測序分析對測序得到的原始reads進行質(zhì)量控制，并過濾得到Cleanreads，對Cleanreads進行拼接組裝，預測編碼基因，并對編碼基因進行通用數(shù)據(jù)庫和專用數(shù)據(jù)庫的功能注釋；對Cleanreads進行分類學分析，統(tǒng)計樣品物種組成和豐度信息。使用MEGAHIT軟件進行宏基因組組裝，過濾短于300bp的序列。使用cd-hit軟件去除冗余，相似性閾值為95%，覆蓋度閾值為90%。通過將非冗余基因的蛋白序列和Nr數(shù)據(jù)庫進行BLAST比對，找到在Nr數(shù)據(jù)庫中最相似的序列，該序列對應的注釋信息即為對應測序基因組基因的注釋信息，比對后可得到樣品的物種組成和相對豐度信息。2.3結果與討論2.3.1長白山苔原帶篤斯越桔內(nèi)生真菌鑒定結果于2018、2019兩年的7、8、9月份從長白山苔原帶采集到150個篤斯越桔樣品，利用組織學方法從這150個樣品分成的1500個組織塊中總共分離得到775株內(nèi)生真菌，發(fā)現(xiàn)在篤斯越桔上存在大量內(nèi)生真菌。經(jīng)形態(tài)學和分子生物學鑒定為4門、21目、31科、48屬。根據(jù)相對分離頻率（RF）分析篤斯越桔內(nèi)生真菌的優(yōu)勢度，一般認為，RF≥10%的內(nèi)生真菌為優(yōu)勢菌，RF≥1%的為常見菌，RF<1%的為稀有菌[91]，具體結果見表2.1。在所分離到的48屬內(nèi)生真菌中，Alternaria（16.90%）、Fusarium（14.06%）為優(yōu)勢菌群，Colletotrichum（6.45%）、Nigrospora（6.06%）次之。已有研究表明，本文分離到的優(yōu)勢菌Alternaria為普遍存在的真菌類型，在多種植物的組織和土壤中廣泛存在[92,93]，F(xiàn)usarium是普遍存在于植物中的內(nèi)生真菌，并且在

長白山苔原帶篤斯越桔內(nèi)生真菌的多樣性及其代謝產(chǎn)物的研究27圖2.6在門水平上篤斯越桔內(nèi)生真菌群落組成及其相對豐度Fig.2.6CommunitycompositionandrelativeabundanceofendophyticfungiinVacciniumuliginosumatphylalevel圖2.7在科水平上篤斯越桔內(nèi)生真菌群落組成及其相對豐度Fig.2.7CommunitycompositionandrelativeabundanceofendophyticfungiinVacciniumuliginosum


本文編號：3068602