發(fā)布時間：2021-02-27 12:08

　　本研究從新疆克拉瑪依瑪18井區(qū)產(chǎn)生的壓裂返排液中篩得一株生物表面活性劑產(chǎn)生菌Y2,經(jīng)16S rRNA測序鑒定為不動桿菌屬。通過單因素和正交實(shí)驗對Y2發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化,確定最佳發(fā)酵條件為:2%的橄欖油為碳源,2 g/L硫酸銨為氮源,發(fā)酵溫度為30℃,鹽度為10 g/L,pH為7。在最適的條件下對Y2菌株進(jìn)行大批量發(fā)酵培養(yǎng)后使用乙酸乙酯萃取生物表面活性劑。所提取的生物表面活性劑被鑒定為非離子型表面活性劑。表面性能測試結(jié)果表明生物表面活性劑的臨界膠束濃度為187.5 mg/L,相應(yīng)的表面張力為30.2 mN/m,且其性能在不同pH（2～12）、溫度（4～100℃）和鹽度（0～100 g/L）下均能保持穩(wěn)定。通過薄層色譜、傅里葉變換紅外光譜分析儀和氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀分析得到,Y2所產(chǎn)生物表面活性劑為脂肽類。將Y2接種于壓裂返排液進(jìn)行生物強(qiáng)化修復(fù),結(jié)果表明,壓裂返排液中的微生物生長情況及活性顯著提高。COD在7天內(nèi)從6646.7 mg/L降至1546.7 mg/L、正構(gòu)烷烴從2635.4 mg/L降至159.7 mg/L,多環(huán)芳烴從918.6μg/L降至209.6μg/L。高通量測序結(jié)果顯示,生... 

【文章來源】：桂林理工大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：102 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

產(chǎn)生物表面活性劑菌株篩選分離結(jié)果:稀釋涂布分離結(jié)果(a)；油平板篩選結(jié)果(b)；血平板篩選結(jié)果(c)、(d)

桂林理工大學(xué)碩士學(xué)位論文16株，分別是F1、F2、Y2、Y3（圖2.1d）。將這四株細(xì)菌在發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)5d后，取發(fā)酵液進(jìn)行排油圈實(shí)驗、表面張力實(shí)驗、乳化實(shí)驗以及液滴坍塌實(shí)驗。如表2.5所示，菌株Y2的排油圈直徑、液滴坍塌直徑、表面張力以及E24都具有最好的結(jié)果，表明菌株Y2具有最佳的產(chǎn)生物表面活性劑能力。表2.5產(chǎn)生物表面活性劑菌株篩選情況Table2.5Thedataforscreeningofbiosurfactant-producingmicroorganisms菌株編號排油圈直徑(mm)E24(%)表面張力(mN/m)液滴坍塌直徑(mm)F165±2.329.68±2.136.17±0.454±0.5F252±1.820.04±2.440.21±0.573.5±1Y2100±1.053.35±0.626.08±0.386±1.0Y370±1.232.12±1.535.13±0.125±1.52.4.2菌株形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果對分離到的生物表面活性劑產(chǎn)生菌Y2進(jìn)行形態(tài)觀察，其在原油平板、LB平板和血平板上的菌落形態(tài)和革蘭氏染色結(jié)果如圖2.2所示。菌株Y2在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)1d后，培養(yǎng)基上出現(xiàn)表面光滑、微凸、淡黃色、略透明的微小菌落，用接種環(huán)挑起菌落，有粘連性。當(dāng)培養(yǎng)時間為2~3d時，菌落顏色變成淡黃色、不透明，菌落直徑為0.5~3mm。在顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，該菌體細(xì)胞呈短小較粗的桿狀。經(jīng)革蘭氏染色后，顯微鏡下觀察到菌體呈紫紅色，表明Y2菌株為革蘭氏陰性菌。圖2.2菌株Y2的菌體形態(tài)(a)，革蘭氏染色結(jié)果(b)Fig2.2ThemorphologyofY2strain(a),gramstainingofY2(b).2.4.3菌株的分子生物學(xué)鑒定結(jié)果菌株Y2的16SrRNA基因PCR擴(kuò)增結(jié)果如圖2.3所示，對照DNAMarkerⅡ發(fā)現(xiàn)Y2在1500bp附近出現(xiàn)一個亮條帶，而PCR擴(kuò)增所用前引物為27f，后引物1492r，故推測菌株16SrRNA擴(kuò)增產(chǎn)物的片段約為1.5Kb左右。

桂林理工大學(xué)碩士學(xué)位論文17圖2.3.Y2的16SrRNA基因擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖Fig2.3.Electropherogramof16SrRNAgeneamplificationproductofY2將測序得到的16SrRNA基因的序列與NCBI數(shù)據(jù)庫比對，選取相似度最高的10株菌株的16SrRNA基因序列（括號內(nèi)為NCBI上的序列號）與Y2的基因序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，結(jié)果如圖2.4所示。圖2.4Y2系統(tǒng)發(fā)育樹Fig2.4PhylogenetictreeofstrainY2由圖2.4可知，Y2菌株與威尼斯不動桿菌（AcinetobactervenetianusATCC31012）的序列相似性為100%，并在系統(tǒng)發(fā)育樹上屬于同一簇，由此可確定該Y2菌株屬于不動桿菌屬（Acinetobacter），并最接近于威尼斯不動桿菌（Acinetobatervenetianus），將其命名為Acinetobactersp.Y2。Y2的基因序列已提交至GenBank，登錄號為MN124779，并在2019年7月29日將其保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCCNO:M2019588。不動桿菌廣泛分布在自然環(huán)境中，已有的報道表明其可以從受石油污染的土壤[41]、沉積物[42]、活性污泥[43]等環(huán)境樣品中篩選得到。部分研究表明該菌具有產(chǎn)生物表

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號：3054210