內(nèi)切纖維素酶在生物化學(xué)工業(yè)中發(fā)揮著無(wú)比重要的作用,例如醫(yī)藥、食品和生物燃料等行業(yè)。它們可以從許多種生物體中分泌到細(xì)胞外,然而,其分泌機(jī)制很少受到關(guān)注。先前的研究表明,大腸桿菌內(nèi)源性內(nèi)切葡聚糖酶BcsZ可以從大腸桿菌DH5α中分泌到細(xì)胞外,但是其分泌機(jī)制仍一無(wú)所知。我們的主要工作是對(duì)其分泌機(jī)制進(jìn)行進(jìn)一步的探究。我們證明了BcsZ在胞外的積累是一種特異性的分泌活動(dòng),而不是由大腸桿菌細(xì)胞裂解造成的。此外,BcsZ的分泌是以周質(zhì)空間為中轉(zhuǎn)站的兩步過(guò)程。BcsZ的N末端存在一個(gè)由21個(gè)氨基酸殘基組成的典型信號(hào)肽,它對(duì)于轉(zhuǎn)運(yùn)是必需的,但我們證明其跨內(nèi)膜并不依賴Sec和TAT途徑。我們推測(cè)可能存在某些未知的信號(hào)肽依賴性孔道蛋白可以介導(dǎo)BcsZ的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)。同時(shí),我們對(duì)BcsZ的跨外膜轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)行了初步的探索,但未得到明確的結(jié)論。為了探究BcsZ跨內(nèi)膜轉(zhuǎn)運(yùn)的具體機(jī)制,我們開發(fā)了一種生長(zhǎng)偶聯(lián)的篩選策略以在大腸桿菌全基因組突變文庫(kù)中尋找影響其分泌的基因。通過(guò)將靶蛋白與來(lái)自枯草芽孢桿菌的果聚糖蔗糖酶(SacB)融合,實(shí)現(xiàn)了蛋白定位與蔗糖敏感性的精確偶聯(lián)。最終,我們通過(guò)這種篩選系統(tǒng)兩個(gè)關(guān)鍵蛋白DnaK和CRP。作為... 

【文章來(lái)源】：山東大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．７ＢｃｓＺ跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的能量分析（ａ）收集誘導(dǎo)４小時(shí)后的￡．ｍ／／ＤＨ５ａ／ｐＴｒｃ－６ｃ９Ｚ細(xì)胞，除??


本文編號(hào)：2933878