冠突曲霉(Aspergillus cristatus)是茯磚茶品質(zhì)的標志性真菌,在人工培養(yǎng)基上,通過控制滲透壓高低即NaCl的濃度,可獲得純子囊孢子或分生孢子,一般真菌是通過高滲透壓甘油途徑(HOG)作出對滲透壓環(huán)境反應(yīng),本實驗室對冠突曲霉(A.cristatus)低滲和高滲條件下的轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn):在高滲透壓培養(yǎng)條件下HOG途徑?jīng)]有被激活,說明該真菌不是通過該途徑調(diào)節(jié)產(chǎn)孢。有研究報道鈣信號途徑參與滲透壓的響應(yīng),我們推測鈣信號途徑參與該菌對滲透壓的響應(yīng),其中質(zhì)膜上的鈣離子轉(zhuǎn)運蛋白的基因Fig,能夠轉(zhuǎn)運鈣離子,可能與有性發(fā)育、無性產(chǎn)孢及菌絲生長有密切關(guān)系,因此,本研究選擇冠突曲霉Fig基因作為研究對象,開展了敲除載體的構(gòu)建,根癌農(nóng)桿菌介導轉(zhuǎn)化,胞外鈣和鈣螯合劑對突變菌株影響等研究,獲得以下結(jié)果:(1)Fig基因全長994 bp,有3個內(nèi)含子,預測編碼271個氨基酸,含有四個跨膜區(qū),屬于疏水蛋白,在第一和第二個跨膜區(qū)之間有保守基序GΦΦGxC(n)C,與其他曲霉Fig基因的進行同源對比發(fā)現(xiàn),Fig基因結(jié)構(gòu)保守,保守結(jié)構(gòu)域及跨膜結(jié)構(gòu)基本相似;(2)通過同源重組的方法構(gòu)建基因敲除載體,利... 

【文章來源】：貴州大學貴州省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

蛋白Fig1保守基序示意圖

技術(shù)路線圖

貴州大學 2019 屆 碩士研究生學位論文臂連接到載體 PDHt/sk-hyg 上構(gòu)建重組載體 FigL-PDHt/sk-hyg，接著用相同的方法將帶有酶切位點的Fig 基因下游同源臂連接到重組載體 FigL-PDHt/sk-hyg 上，獲得敲除載體 FigL-PDHt/sk-hyg-FigR。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]茯磚茶“金花菌”vcx基因克隆及表達分析[J]. 任秀秀,譚玉梅,任春光,王玉臣,劉永翔,劉作易.  基因組學與應(yīng)用生物學. 2017(12)
[2]冠突散囊菌菌落計數(shù)方法的優(yōu)化[J]. 馬躍,郝彬秀,田海霞,李頌,王春玲.  食品與發(fā)酵科技. 2017(06)
[3]冠突曲霉veA基因缺失型與野生型的差異代謝物研究[J]. 任春光,譚玉梅,任秀秀,王亞萍,劉永翔,劉作易.  菌物學報. 2018(02)
[4]冠突曲霉產(chǎn)孢相關(guān)基因的克隆及功能分析[J]. 王亞萍,譚玉梅,劉永翔,劉作易.  基因組學與應(yīng)用生物學. 2017(09)
[5]不同產(chǎn)區(qū)加工的茯磚茶中“金花”菌的分離及分子鑒定[J]. 趙仁亮,吳丹,姜依何,朱旗.  湖南農(nóng)業(yè)大學學報(自然科學版). 2016(06)
[6]冠突散囊菌nsdD基因超表達菌株的構(gòu)建及表型分析[J]. 余春芳,熊慶,李文仿,譚玉梅,劉永翔,劉作易,歐琴.  基因組學與應(yīng)用生物學. 2017(03)
[7]貴州地區(qū)茯磚茶“金花菌”的分離和分子鑒定[J]. 譚玉梅,王亞萍,葛永怡,任秀秀,王玉臣,劉作易.  菌物學報. 2017(02)
[8]人工接種冠突散囊菌對白茶主要呈味物質(zhì)的影響[J]. 劉菲,孫威江,黃艷,王恒,黃雅彬.  菌物學報. 2016(08)
[9]謝瓦氏曲霉間型變種esdC基因的功能分析[J]. 劉榮,譚玉梅,劉永翔,劉作易.  菌物學報. 2015(02)
[10]冠突散囊菌轉(zhuǎn)錄因子stf1基因的克隆及其表達分析[J]. 譚玉梅,王玉臣,劉永翔,桑石磊,劉作易.  菌物學報. 2015(01)

博士論文
[1]構(gòu)巢曲霉高親和性鈣離子吸收系統(tǒng)參與生長發(fā)育調(diào)控的機制研究[D]. 王莎.南京師范大學 2013
[2]茯磚茶中冠突散囊菌分離培養(yǎng)及其發(fā)酵液胞外多糖與應(yīng)用酶學研究[D]. 鄧放明.湖南農(nóng)業(yè)大學 2007
[3]氟與茶葉品質(zhì)化學和微生物學的研究[D]. 呂毅.浙江大學 2004

碩士論文
[1]冠突散囊菌液體發(fā)酵工藝及其發(fā)酵液對消化酶活性影響的研究[D]. 楊撫林.湖南農(nóng)業(yè)大學 2005



本文編號：2929862