致病弧菌是可引起人和水生生物共患病的一類病原性弧菌。弧菌的防治一般采用抗生素或化學制劑等,但隨著耐藥性菌株的出現(xiàn),防控變得十分棘手,由此,噬菌體的應用重新出現(xiàn)在大眾視野。本研究意在篩選對多種致病性弧菌具有高效裂解性的寬譜噬菌體,并應用此類噬菌體制備成新型生物抑菌劑,來控制水產(chǎn)品養(yǎng)殖和加工過程中致病性弧菌的繁殖和污染。（1）從海魚、淡水魚、貝類宰殺污血水樣品中分離純化得到27株弧菌噬菌體,6株弧菌噬菌體透射電鏡下形態(tài)分別為短尾噬菌體科和肌尾噬菌體科兩類。經(jīng)裂解譜測定,得噬菌體VppYZU-Y1和噬菌體OY-1裂解譜最寬,在pH5.0～12.0條件下噬菌體的穩(wěn)定性較好,屬于耐堿不耐酸型;50℃～80℃條件下噬菌體活性逐步降低。對噬菌體進行最佳感染復數(shù)、一步生長曲線的測定,挑選得到出穩(wěn)定性好,裂解能力強的噬菌體。（2）采用全基因組測序的方法測定噬菌體的基因信息。噬菌體OY-1的全基因組信息未找到同源噬菌體,判斷該噬菌體為新噬菌體。噬菌體OY-1的基因組全長為43479 bp,其中編碼基因總長度分別為38403 bp,平均長度分別為936.66 bp,占總長的88.33%,GC含量為49.26... 

【文章來源】：揚州大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：92 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１弧菌噬菌體透射電鏡照片??Ｆｉｇ．?２－１?Ｅｌｅｃｔｒｏｎ?ｍｉｃｒｏｇｒａｐｈ?ｏｆ?Ｖｉｂｒｉｏ?ｐｈａｇｅｓ??

?２．３．４嗤菌體的ｐＨ穩(wěn)定性??噬菌體ｐＨ穩(wěn)定性結果如圖２－２所示，在ｐＨ?５．０？９．０范圍內(nèi)，噬菌體效價較高，其裂??解活性均較為穩(wěn)定和良好。噬菌體侵染宿主首先需要吸附，吸附作用受ｐＨ等條件影響，??進而影響到噬菌體對宿主的侵染［８４］；當ｐＨ值降低或升高時，噬菌體的裂解活性有所降低。??噬菌體ＯＹ－１、ＶｐｐＹＺＵ－Ｙ?１在ｐＨ＞１０．０的條件下仍保持較高的存活率（５４．９５％以上），具??有嗜堿特性；噬菌體〇丫－１在？只３．０幾乎完全失活，屬于耐堿不耐酸型；￥＾＾２１１－￥１在??酸性條件下，活性顯著下降，但在堿性條件下穩(wěn)定性較好，屬于畏酸嗜堿型。??９?５?ｒ?－Ｂ－ｏｖ．，?Ａ?＿＿－ＶＰＰＹＺＵ－Ｙｌ?Ｂ??工?１０?＿?＿ｚ??Ｉ９－０－?／一！８＿?／??＾８－ｓ■?／?筆?４．??Ｉ?１?ｈ．?Ｉ??１?／?／■??２?４?６?８?１０?１２?２?４?６?８?１０?１２??ｐＨ?ｐＨ??圖２－２弧菌噬菌體的ｐＨ穩(wěn)定性??Ｆｉｇ．?２－２?ｐＨ?ｓｔａｂｉｌｉｔｙ?ｏｆ?Ｖｉｂｒｉｏ?ｐｈａｇｅｓ??注：Ａ為最小弧菌噬菌體ＯＹ－１；?Ｂ為副溶血性弧菌噬菌體ＶｐｐＹＺＵ－Ｙｌ??２．３．５?Ｐｆｅ國體的熱穩(wěn)定性??噬菌體熱穩(wěn)定性結果如圖２－３所示，噬菌體ＯＹ－１經(jīng)５０°Ｃ處理６０?ｍｉｎ后活性均基本沒??有變化；在６０°Ｃ下作用６０?ｍｉｎ后

?ｉｔ??ｆ?—ｔ體純化帶??■ｄａ??圖３－１噬菌體純化結果??Ｆｉｇ．?３－１?Ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ｐｈａｇｅ?ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ??３．３．２噬菌體ＤＮＡ樣品檢測??如圖３－２所示，為噬菌體ＯＹ－１ＤＮＡ瓊脂糖凝膠電泳圖，電泳條帶清晰完整，表示無??污染無降解，可以繼續(xù)后續(xù)測第三代全基因組實驗的要求。??Ｉ??圖３－２噬菌體核酸鑒定??Ｆｉｇ．?３－２?Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｇｅｎｏｍｅ?ｏｆ?ｐｈａｇｅｓ??注：Ｍ：?Ｍａｒｋｅｒ；泳道?１：?ＯＹ－１；??３．３．３噬菌體基因組概述??最小弧菌噬菌體ＯＹ－１基因組全長為４３４７９?ｂｐ，編碼基因總長度分別為３８４０３?ｂｐ，平??均長度為９３６．６６?ｂｐ，占總長的８８．３３％，ＧＣ含量為４９．２６％，有４１個開放閱讀框（ＯＲＦｓ）。??４１個ＯＲＦｓ編碼蛋白中都可以在數(shù)據(jù)庫中搜到同源性基因序列，其中２４個ＯＲＦｓ編碼的??蛋白為假設蛋白，有１７個蛋白序列功能明確，基因組數(shù)據(jù)顯示最小弧菌噬菌體ＯＹ－１為一??種新的噬菌體。基因組數(shù)據(jù)顯示最小弧菌噬菌體ＯＹ－１為一種新的噬菌體？，分析表明最小??弧菌噬菌

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：2914282