GATA4是鋅指轉錄因子GATA結合蛋白家族的成員之一。GATA4最初作為心臟發(fā)育的調節(jié)因子被發(fā)現(xiàn),隨后研究發(fā)現(xiàn)GATA4參與調節(jié)動物體內各種基因的表達。GATA4除了調節(jié)心臟發(fā)育和轉錄也參與其它生物過程,其中包括癌細胞增殖。本實驗室早期研究發(fā)現(xiàn),細絲蛋白A（FLNA）對RNA聚合酶I（Pol I）和RNA聚合酶III（Pol III）基因轉錄有福調控作用,敲低FLNA促進腫瘤細胞增殖。最近的mRNA-seq分析表明,FLNA敲低增加SaOS2細胞中GATA4的表達;提示GATA4可能參與調節(jié)Pol I和Pol III指導的基因轉錄。為證明這一推測,我們制備了GATA4 shRNA瞬時表達細胞和穩(wěn)定表達細胞系,采用RT-qPCR和Western Blot的方法探究FLNA對敲低細胞系中Pol I和Pol III的基因表達和細胞增殖的影響。結果表明,GATA4敲低抑制Pol I和Pol III基因轉錄和細胞增殖。進一步對GATA4調節(jié)Pol I和Pol III基因轉錄機制分析表明,GATA4敲低抑制Pol I特異性轉錄因子RRN3和UBF1的表達以及Pol III特異性轉錄因子BRF1和... 

【文章來源】：武漢科技大學湖北省

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【學位級別】：碩士

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摘要
Abstract
第1章 引言
    1.1 研究意義
    1.2 研究現(xiàn)狀
        1.2.1 細絲蛋白（filamins）
        1.2.2 FLNA生物功能
        1.2.3 GATA家族
        1.2.4 GATA4 與發(fā)育和疾病發(fā)生
        1.2.5 GATA4與癌癥
        1.2.6 RNA聚合酶Ⅲ基因轉錄與癌癥
    1.3 本課題產生的依據(jù)和研究目標
第2章 實驗材料與方法
    2.1 主要材料和儀器
        2.1.1 實驗所需的細胞和質粒
        2.1.2 實驗耗材
        2.1.3 實驗試劑
        2.1.4 實驗儀器
        2.1.5 相關試劑溶液的配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 基因克隆
        2.2.2 細胞培養(yǎng)、細胞瞬時轉染及穩(wěn)定表達細胞系的建立
        2.2.3 實時熒光定量PCR（RT-qPCR）
        2.2.4 Western Blot
        2.2.5 熒光素酶測定
    2.3 實驗數(shù)據(jù)處理
第3章 實驗結果
    3.1 FLNA敲低后增強GATA4 的表達
    3.2 GATA4 shRNA 瞬時表達降低部分 Pol Ⅰ 和 Pol Ⅲ基因轉錄
    3.3 GATA4 shRNA穩(wěn)定細胞系的建立
    3.4 GATA4 shRNA穩(wěn)定表達降低部分Pol Ⅰ和 Pol Ⅲ轉錄產物的表達
    3.5 GATA4 shRNA穩(wěn)定表達抑制細胞增殖
    3.6 GATA4 敲低減少RRN3和UBF1 的表達
    3.7 GATA4 敲低減少BRF1和TFIIIC2 的表達
    3.8 BRF1和TFⅢC2 啟動子活性檢測
    3.9 SP1 敲低影響GATA4 表達、GATA4 影響SP1 表達
第4章 結論與展望
致謝
參考文獻
附錄1 攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文
附錄2 攻讀碩士學位期間參加的科研項目



本文編號：2898963