脂肪酶（lipase,EC3.1.1.3）屬于羧基酯水解酶類(lèi),用于催化水解三酰甘油,廣泛存在于自然界中,其中微生物是脂肪酶的重要來(lái)源。目前對(duì)酵母、曲霉、假單胞菌、青霉、根霉等產(chǎn)脂肪酶的微生物研究較多。本課題主要研究的對(duì)象是米曲霉來(lái)源的脂肪酶,我們從NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)（Genbank）中選擇了8種米曲霉脂肪酶基因,進(jìn)行目標(biāo)基因的人工合成并在大腸桿菌中實(shí)現(xiàn)異源表達(dá)。論文對(duì)脂肪酶酶活最高的脂肪酶基因進(jìn)行分子改造,進(jìn)一步提升其酶活性,并對(duì)獲得的脂肪酶突變體的酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了研究,研究結(jié)果如下:1、首先成功在大腸桿菌中表達(dá)了8種米曲霉脂肪酶基因,并對(duì)其基本酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了研究。對(duì)根據(jù)大腸桿菌密碼子偏好性?xún)?yōu)化的8種米曲霉脂肪酶基因進(jìn)行人工合成,連接在質(zhì)粒pET-28a（+）中,并在大腸桿菌E.coli BL21（DE3）中實(shí)現(xiàn)表達(dá),成功構(gòu)建8株重組脂肪酶工程菌。將這8株工程菌進(jìn)行搖瓶發(fā)酵,離心獲得菌體,經(jīng)超聲破碎后得到8種重組脂肪酶的粗酶液,并測(cè)定其水解活性,發(fā)現(xiàn)經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)室前期挖掘和研究的AOL-3的酶活力最高,為521.12 U/g。實(shí)驗(yàn)對(duì)8種脂肪酶的最適溫度、pH以及底物特異性進(jìn)行了初步研究,發(fā)現(xiàn)米曲... 

【文章來(lái)源】：浙江工業(yè)大學(xué)浙江省

【文章頁(yè)數(shù)】：76 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

脂肪酶催化機(jī)理Figure1-1.Thelipasecatalysismechanism

圖 2-3 質(zhì)粒提取的凝膠電泳圖Figure 2-3. Agarose electrophoresis map of plasmidLane M:2K plusⅡMarker; lane 1-2：Plasmid of pET-28a(+)-aol-(1米曲霉脂肪酶基因表達(dá)的 SDS-PAGE 驗(yàn)證-PAGE 是聚丙烯酰胺凝膠電泳，是以聚丙烯酰胺凝膠作為支持泳技術(shù)，用于分離和分析蛋白質(zhì)。8 種米曲霉經(jīng)過(guò)搖瓶誘導(dǎo)發(fā)進(jìn)行 SDS-PAGE 分析，與誘前進(jìn)行比較，如圖 2-4 所示。

圖 2-3 質(zhì)粒提取的凝膠電泳圖Figure 2-3. Agarose electrophoresis map of plasmidLane M:2K plusⅡMarker; lane 1-2：Plasmid of pET-28a(+)-aol-(1-8)曲霉脂肪酶基因表達(dá)的 SDS-PAGE 驗(yàn)證GE 是聚丙烯酰胺凝膠電泳，是以聚丙烯酰胺凝膠作為支持介技術(shù)，用于分離和分析蛋白質(zhì)。8 種米曲霉經(jīng)過(guò)搖瓶誘導(dǎo)發(fā)酵行 SDS-PAGE 分析，與誘前進(jìn)行比較，如圖 2-4 所示。


本文編號(hào)：2896824