睪丸酮叢毛單胞菌(Comamonas testosteroni)是一種能夠降解甾體類激素的革蘭氏陰性細(xì)菌,因其在環(huán)境修復(fù)中有重要的生物學(xué)作用,國內(nèi)外專家學(xué)者對其在菌體細(xì)胞與環(huán)境、菌體內(nèi)代謝酶、菌體基因之間相互作用等進(jìn)行了廣泛研究。本文以睪丸酮叢毛單胞菌中短鏈脫氫酶KAR為研究對象,通過敲除菌株構(gòu)建、甾體類激素誘導(dǎo)、高效液相色譜分析、質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化等方法研究KAR基因?qū)ξ宸N甾體類激素的降解作用,同時(shí)研究了睪丸酮叢毛單胞菌中三種調(diào)控蛋白對KAR的生物學(xué)調(diào)控作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:通過HPLC檢測野生型和KAR敲除突變的睪丸酮叢毛單胞菌激素降解情況,激素分別誘導(dǎo)14小時(shí)后,各種激素的殘留量呈現(xiàn)出明顯的差距。其中突變菌株中睪丸酮?dú)埩袅恳哂谝吧?3%左右;雌酮?dú)埩袅恳哂谝吧?7%左右;孕酮雌酮?dú)埩袅恳哂谝吧?8%左右,而雌二醇和甲睪酮分別相差9%和8%。睪丸酮叢毛單胞菌KAR基因敲除以后其降解甾體類激素的能力受到了影響,影響程度上睪丸酮雌酮孕酮雌二醇甲睪酮。通過將含有三種調(diào)控蛋白的重組質(zhì)粒與含啟動(dòng)子的KAR重組質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化到BL21菌株中,激素誘導(dǎo)后,ELSA檢測結(jié)果為,LuxR與KAR的共轉(zhuǎn)化菌中,KAR表達(dá)量明顯上升;LysR與KAR的共轉(zhuǎn)化菌中,KAR表達(dá)量下降;TetR與KAR的共轉(zhuǎn)化菌中,KAR表達(dá)量無明顯變化。本文實(shí)驗(yàn)結(jié)果對于進(jìn)一步研究KAR酶在睪丸酮叢毛單胞菌中甾體類激素代謝作用及調(diào)控研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【學(xué)位單位】：長春理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：Q935
【部分圖文】：

圖 2.1 KAR 目的基因 PCR 電泳結(jié)NA Marker DL2000； 1：KAR 目的基stosteroni 為模板進(jìn)行 PCR 反 786 bp，說明成功擴(kuò)增出 K-T-KAR 載體鑒定R 載體構(gòu)建結(jié)果

圖 2.1 KAR 目的基因 PCR 電泳結(jié)果圖M： DNA Marker DL2000； 1：KAR 目的基因 PCR 產(chǎn)物 C. testosteroni 為模板進(jìn)行 PCR 反應(yīng)擴(kuò)增出 K量約為 786 bp，說明成功擴(kuò)增出 KAR 基因片D18-T-KAR 載體鑒定T-KAR 載體構(gòu)建結(jié)果

圖 2.3 pMD18-T-KAR PCR 鑒定電泳結(jié)果：DNA Marker DL2000；1：KAR 目的基因 PCR功構(gòu)建的重組質(zhì)粒 pMD18-T-KAR 的目標(biāo)基因（786 bp）相同的片段。圖 2.4 pMD18-T-KAR 雙酶切鑒定電泳結(jié)
【參考文獻(xiàn)】

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1 李爾煬,鄭曉林,史樂文;工程菌處理高純二甲醚生產(chǎn)廢水的研究[J];環(huán)境科學(xué)與技術(shù);2003年02期

2 劉和,陳英旭;環(huán)境生物修復(fù)中高效基因工程菌的構(gòu)建策略[J];浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版);2002年02期

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1 陳梅芳;產(chǎn)奎尼酸基因工程菌的構(gòu)建[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2003年

本文編號：2848853