擬除蟲菊酯殺蟲劑的環(huán)境持久性弱而且毒性較小。在害蟲防治方面,擬除蟲菊酯殺蟲劑被廣泛作為有機氯農(nóng)藥和有機磷農(nóng)藥的有效替代品。高效氯氰菊酯(β-CYP)是一種常用的擬除蟲菊酯類殺蟲劑,具有環(huán)境雌激素效應,是一種高親脂性的殺蟲劑,β-CYP被廣泛應用于室內和田間害蟲的預防和整治等方面。β-CYP在雄性動物生殖方面,表達雌性特異性蛋白的雄性動物可以通過環(huán)境雌激素(EEs)的促使來實現(xiàn),β-CYP可損傷雄性動物性別的間性和雄性的生殖功能。硒(Se)是一種對機體非常重要的微量營養(yǎng)元素,具有眾所周知的抗氧化性質,對人體的健康至關重要。Se是谷胱甘肽過氧化物酶的重要組成元素,它主要存在于睪丸中,對精子的分化過程中,細胞核和線粒體膜的氧化損傷方面有很好的保護作用,也是精子的頸部形成過程中所必需的一種結構蛋白。Se在睪酮的生物合成中起著至關重要的作用,同時Se在精子的形成過程和精子的正常發(fā)育過程中發(fā)揮著重要的作用。Se和硒蛋白能夠確保精子的活力,并提供對活性氧的保護作用。富硒螺旋藻(Se-SP)是一種新型的天然抗氧化劑,具有很高的營養(yǎng)價值。方法:1.通過檢測斑馬魚性腺的發(fā)育狀況、精子的活性、抗氧化酶的活性、組織切片、測定激素分泌的水平、分析精子的發(fā)生過程中相關蛋白和相關基因的表達,探討Se-SP對暴露于β-CYP的雄性斑馬魚的生殖系統(tǒng)的保護作用。2.通過觀察斑馬魚胚胎的發(fā)育過程,24hpf胚胎的自主抽動率,48hpf胚胎的孵化率和心率以及72hpf和96hpf胚胎的體軸彎曲率來探討Se-SP對暴露于β-CYP的斑馬魚的胚胎發(fā)育的保護作用。研究結果:1.β-CYP破壞斑馬魚DNA的完整性,使DNA發(fā)生斷裂。2.β-CYP能減少雄性斑馬魚精子的數(shù)量,降低精子的活力,縮短精子的活動周期,損傷精子的DNA,使精子的DNA發(fā)生斷裂,破壞DNA的完整性。3.β-CYP能影響斑馬魚性腺的發(fā)育,促進卵黃蛋白原(VTG)的生物合成和雌激素(E2)的分泌,增加了精原細胞的數(shù)量和精母細胞的數(shù)量,減少了精子細胞的數(shù)量和支持細胞的數(shù)量。4.50 mg/LSe-SP(Se:2mg/g Se-SP)幾乎完全抑制了β-CYP的毒害效應。Se-SP對β-CYP處理斑馬魚睪丸的保護作用機制是通過下調基因cpy19a、nanos2 piwill、dazl和sycp 3的表達,上調基因odf3b、igf3、insl3和dmrt1的表達,增強抗氧化酶的活性,增加雄激素的分泌,從而影響睪丸睪酮的產(chǎn)生和精子的發(fā)生。5.β-CYP可以影響斑馬魚的胚胎發(fā)育,降低斑馬魚的孵化率,增加斑馬魚胚胎出現(xiàn)畸形的頻率。6.Se-SP可以降低β-CYP對斑馬魚胚胎發(fā)育的毒害作用結論:1.Se-SP能有效地抑制精母細胞的分化過程中β-CYP暴露所致的性腺的氧化損傷。2.Se-SP能有效提高暴露于β-CYP的斑馬魚的精子的數(shù)量,精子的活力,精子的活動周期,以及精子DNA的完整性。3.Se-SP能有效地抑制β-CYP對斑馬魚胚胎發(fā)育的毒害作用,保護斑馬魚胚胎,使其發(fā)育趨于正常。
【學位單位】：安徽大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：X171.5
【部分圖文】：

時發(fā)出綠色熒光，在單鏈ＤＮＡ存在時發(fā)出橙色熒光或紅色熒光，因此，可以通逡逑過顏色的變化來識別ＤＮＡ中的斷裂Ｉ％。逡逑如圖２所示，發(fā)出綠色熒光的斑馬魚的ＤＮＡ是完整的，而發(fā)出紅色熒光或逡逑橙色熒光的斑馬魚的ＤＮＡ己經(jīng)變性。Ｐ－ＣＹＰ顯著地破壞了斑馬魚ＤＮＡ的完整逡逑性。５０邋ｍｇ／Ｌ邋Ｓｅ－ＳＰ處理組與Ｐ－ＣＹＰ處理組相比，ＤＮＡ的損傷幾乎得到完全地保逡逑護。因此，我們認為本研宄中Ｓｅ－ＳＰ的最佳劑量為５０邋ｍｇ／Ｌ。逡逑因此，我們選擇了邋５０邋ｍｇ／Ｌ的Ｓｅ－ＳＰ進行后續(xù)實驗。逡逑１４逡逑

Ｗｉｔｈｉｎ邋ａ邋ｃｏｌｕｍｎ：邋＊Ｐ邋＜邋０．０５邋ｒｅｌａｔｉｖｅ邋ｔｏ邋ｃｏｎｔｒｏｌｓ；邋ＵＰ邋＜邋０．０５邋ｒｅｌａｔｉｖｅ邋ｔｏ邋ｔｈｅ邋ｐ－ＣＹＰ邋ｇｒｏｕｐ邋（ｎ邋＝邋６／ｇｒｏｕｐ）．逡逑３．１．３邐Ｓｅ－ＳＰ對Ｐ－ＣＹＰ處理斑馬魚ＧＳＩ的影響逡逑如圖３所示，暴露于７ｎｍｏｌ／Ｌｐ－ＣＹＰ斑馬魚的ＧＳＩ為２．１１±０．０３％，比對照逡逑組低２２．８４％，但是Ｓｅ－ＳＰ或ＳＰ處理可以抑制Ｐ－ＣＹＰ降低斑馬魚ＧＳＩ這一作用逡逑（Ｐ＜０．０１）。雖然在Ｐ－ＣＹＰ處理的斑馬魚中，ＳＰ能夠將ＧＳＩ的值提高到２．３３±０．０６％，逡逑但是Ｓｅ－ＳＰ能夠將ＧＳＩ的值提高到２．７丨±０．０５％，與對照組（２．７５±０．０５％）基本一致，逡逑１６逡逑

逑組ＤＮＡ的完整性達８１．７牡３．１５％，而Ｐ－ＣＹＰ處理組ＤＮＡ完整性僅為逡逑５９．０１±６．０８％（圖４Ｄ）。與對照組相比，相同濃度的Ｓｅ－ＳＰ或ＳＰ單獨處理，對斑馬逡逑魚精子的各項指標的影響不顯著。逡逑Ａ邐Ｂ逡逑－邋１００－｜邐＃邋＿逡逑＾邐８００００－Ｊ逡逑幽邋Ｓ邐■邐■W逡逑＾邋６００００－邋１Ｈ邐WWＩ邐ｍ邋ＨＢ邋ｍ邋＊＃逡逑ｌ－ｌ（Ｎ邐Ｉｎ邋｜：：｜邋｜｜｜｜逡逑ｃ／邋４邐Ｙ邋Ｚ邐ｏ°°邐＾邐＾邋Ｊ－邋＾逡逑Ｃ邐Ｄ逡逑４００－ｊ邐１００－．邐＃邋妓逡逑■Ｓ邐本邐ｒ＾ｍ邐＊＃逡逑５邐－ｒ－邋ＳＭ邋４－邐．邋ＨＩ邋＆~|邋ｒ＾ｌ逡逑ｒｏ0－Ｑ邋ｎ邋＾邐｜邐■邋＞邋■邋■邋Ｉ邋４－逡逑ｆ２。。．邋■，邐．：邋ａ邋卜．「］邋ｎ逡逑１邋ｊＢ邋Ｂ邋Ｌ－ｕ邋ＬＢ－邋°邋ＪＵｊｉｌＵＭｉＬ逡逑ｃ／邋＾邋４邋ｆ邋Ｊ邋＾邋＾邋ｈ邋／邋ｃ／逡逑＾邋Ｎ邋＾邋＂逡逑圖４．Ｓｅ－ＳＰ對暴露ｐ邋７ｍｎｏｌ／Ｌｐ－ＣＹＰ２１天的斑馬魚精子各項指標的影響。（Ａ）精子濃度，（Ｂ）精子活力，（Ｃ）逡逑精子的活力周期和（Ｄ）精子的ＤＮＡ完整性。逡逑Ｆｉｇ．邋４．邋Ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋Ｓｅ－ＳＰ邋ｏｎ邋ｓｐｅｎｎ邋ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ｆｉｓｈ邋ｅｘｐｏｓｅｄ邋ｔｏ邋７邋ｎｍｏｌ／Ｌ邋Ｐ－ＣＹＰ邋ｆｏｒ邋２１邋ｄａｙｓ．邋（Ａ）Ｓｐｅｍｉ逡逑ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ

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