【摘要】：本研究以亳菊為實驗材料,利用實驗室已有的亳菊內(nèi)生菌和非內(nèi)生菌株,與組培苗共生培養(yǎng),通過生理生化試驗、活性物質(zhì)測定試驗、轉(zhuǎn)錄組等手段,篩選出促進亳菊生長和活性物質(zhì)積累的菌株,并對其活性物質(zhì)積累的分子機制進行初步研究,將為今后在農(nóng)業(yè)上的開發(fā)應用奠定重要基礎。本研究主要內(nèi)容及結果如下:1.亳菊的組織培養(yǎng)體系建立:以莖段、莖尖、葉片作為外植體分別做組織培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)莖尖的成活率最好;通過優(yōu)化組織培養(yǎng)基配方,最后選擇適合誘導愈傷組織的培養(yǎng)基為1/2MS+瓊脂8.5 g/L+蔗糖30.0 g/L,pH 5.8,適合生根和增殖的培養(yǎng)基為MS+瓊脂8.5 g/L+蔗糖30.0 g/L,pH 5.8。2.功能菌株的初篩:將前期分離得到的14株菌株接種亳菊組培苗,共生培養(yǎng)15天后,觀察亳菊組培苗存活情況、長勢,測定株高、根長、根數(shù)等生長指標,初步篩選出對亳菊組培苗有促生長作用的促生長亳菊內(nèi)生菌BJF10和BN7。3.功菌株的復篩:與內(nèi)生菌共生培養(yǎng)15 d后的亳菊組培苗煉苗一周后移栽至溫室大棚,一個月后分別測定接菌組和不接菌對照組亳菊的生理指標,包括葉片葉綠素含量、MDA(丙二醛)含量、根系活力、可溶性糖含量、PAL(苯丙氨酸解氨酶)酶活。結果發(fā)現(xiàn),接種BJF10的亳菊葉片葉綠素含量與對照相比,達到了顯著性差異;接種BN7的亳菊葉片與對照相比,MDA含量下降了;同時發(fā)現(xiàn)BJF10,BN7均不同程度地提高了亳菊的根系活力、可溶性糖含量、PAL酶活性。4.促生菌對亳菊葉片綠原酸含量的影響:對樣品處理、流動相及檢測波長條件進行優(yōu)化,建立測定綠原酸含量的HPLC方法,通過對內(nèi)生菌BJF10、BN7處理組亳菊葉片綠原酸含量測定,結果發(fā)現(xiàn),內(nèi)生菌BJF10、BN7均能提高葉片綠原酸含量,其中BJF10為不接菌對照組的2倍,說明內(nèi)生菌BJF10和BN7能明顯提高亳菊活性物質(zhì)。5.轉(zhuǎn)錄組分析:對內(nèi)生菌處理組和對照組亳菊葉片組織樣本進行轉(zhuǎn)錄組測序,重點分析活性物質(zhì)代謝相關基因的差異表達譜,以期從分子水平上揭示菌株對亳菊葉片基因表達水平的影響。綜上所述,本研究篩選獲得菌株BJF10和BN7,能促進亳菊生長和活性物質(zhì)綠原酸的積累,為今后研制農(nóng)用微生物復合菌劑等產(chǎn)品奠定了基礎。
【學位授予單位】：阜陽師范學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：Q93
【圖文】：

生長菌株的篩選逐步打開培養(yǎng)瓶口，每天噴灑適量水使植株保持一定，根部洗凈培養(yǎng)基，對各處理組亳菊苗生物量、葉片狀進行測定。統(tǒng)計的株高、根數(shù)，之后移入花盆營養(yǎng))中培養(yǎng)。果與分析進亳菊組培苗生長內(nèi)生菌的篩選用14株亳菊內(nèi)生菌，通過回接亳菊組培苗，培養(yǎng)3周，內(nèi)生菌回接后亳菊組培苗存活率達到100%（見表2.1）菊的生長速度、葉片數(shù)量、株高、根數(shù)等方面具有比未征。跟據(jù)亳菊苗生長情況，初步篩選出2株亳菊內(nèi)生菌進一步研究，結果如圖2-1所示。A B

圖 2-2 BN7 與組培苗共培養(yǎng)生長情況 A: BN7 B: CKure 2-2 Co-culture growth of BN7 and tissue culture seedlings A: BN7 B圖 2-3 BN14 與組培苗共培養(yǎng)生長情況 A: BN14 B: CKre 2-3 Co-culture growth of BN14 and tissue culture seedlings A: BN14 A B

9圖 2-3 BN14 與組培苗共培養(yǎng)生長情況 A: BN14 B: CKre 2-3 Co-culture growth of BN14 and tissue culture seedlings A: BN14 表 2-1 亳菊內(nèi)生菌對亳菊組培苗生長情況的影響ffect of endophytic fungi on the growth of tissue culture seedlings of C.mori存活率 菌在組培苗周圍的形態(tài) 組培苗100％ 菌株不生長 葉片青綠50％菌淺灰色，表面有褶皺，背面灰色，長滿培養(yǎng)基植株下部正常生長

【參考文獻】

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本文編號：2762454