發(fā)布時間：2020-06-27 23:18

【摘要】：近年來,植物病毒病害在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)過程中給農(nóng)產(chǎn)品質量和數(shù)量帶來了巨大損失,其中以馬鈴薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)引起的病毒病害尤為嚴重。雖然目前對該病害的基礎研究有所進展,市面上也有少數(shù)幾種藥劑能有效地治理該種病害,但其具體的作用機理尚不清楚,導致研發(fā)針對該病原體的特效性藥劑難度極大。如何有效地篩選抗PVY藥物是防治馬鈴薯病毒病害的關鍵問題,因此建立一個以PVY關鍵蛋白為潛在靶標的藥物篩選模型,尋找高活性的抗PVY藥物,對防治馬鈴薯病毒病具有重要意義。本論文以原核表達純化的馬鈴薯Y病毒外殼蛋白(Coat protein,CP)為靶標,利用等溫量熱滴定法、微量熱泳動法、農(nóng)桿菌介導法和蛋白免疫印跡法研究PVY-CP與抗病毒小分子之間的相互作用,測得PVY-CP與抗病毒小分子之間的結合常數(shù)、結合位點數(shù)及主要作用形式。以藥物與PVY-CP的作用力為指標,進行離體水平的抗PVY藥物篩選。后續(xù)通過突變體蛋白和活體植株的兩種驗證實驗初步探究藥劑的作用機理,建立了基于PVY-CP為潛在靶標的藥物篩選模型。研究結果表明,在體外,病毒唑、鹽酸嗎啉胍與PVY-CP均有不同程度的結合力,其結離常數(shù)大小為病毒唑(4.56μM)鹽酸嗎啉胍(77.6μM),而氨基寡糖、苯并噻二唑與PVY-CP沒有相互結合;繼而研究了楊梅素衍生物與PVY-CP的相互作用,結果表明LP4、LP6、LP9和LP17與PVY-CP均有不同程度的結合力,其中LP6和LP9與PVY-CP的結合力比LP4和LP17與PVY-CP的結合力強。通過突變體蛋白的驗證實驗明確了病毒唑與PVY-CP的結合位點為精氨酸(R)153、精氨酸(R)179、天冬氨酸(D)197和賴氨酸(K)217。通過活體驗證實驗表明了病毒唑對PVY-CP在活體植株內的表達有抑制作用。
【學位授予單位】：貴州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S432.41
【圖文】：

實驗技術路線

4.1 pET28a-PVY-CP(wt)重組載體的酶切驗證道 1:pET28a-PVY-CP(wt) 重組載體雙酶切；pET28a-PVY-CP(wt) recombinant vector digestLine 1, pET28a-PVY-CP(wt)plasmids were digrs negative control. 1 和泳道 2 可以看出，雙酶切后產(chǎn)生了帶，可以看出說明 pET28a-PVY-CP(wY-CP(wt)重組載體的測序鑒定重組成功的重組質粒送到上海生工生結果與 NCBI 中已經(jīng)提交的序列進行比列與其他已提交的基因序列（GenBank（圖 4.2）。所有結果均可證明，構建的

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3 肖長義;;乳頭瘤病毒外殼蛋白的研究進展[J];國外醫(yī)學(微生物學分冊);2000年04期

4 楊立昌,乙引;馬鈴薯Y病毒外殼蛋白基因表達效率影響因素的研究[J];生物學通報;2005年02期

5 儲瑞銀;郭濤;潘乃z_;陳章良;;馬鈴薯Y病毒外殼蛋白基因的克隆及序列分析[J];Journal of Integrative Plant Biology;1992年03期

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7 黃峰;陳青;陳紅運;白靜;李桂芬;余芳平;陳洪俊;;黃瓜綠斑駁花葉病毒低風險參照物質的研制[J];植物檢疫;2009年04期

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1 徐平麗;張傳坤;趙晉平;李廣存;李新國;單雷;;花生條紋病毒外殼蛋白基因植物表達載體構建及遺傳轉化研究初報[A];山東省植物生物學研究進展學術年會論文集[C];2006年

2 徐平麗;張傳坤;趙晉平;李廣存;李新國;單雷;;花生條紋病毒外殼蛋白基因植物表達載體構建及遺傳轉化研究初報[A];提高全民科學素質、建設創(chuàng)新型國家——2006中國科協(xié)年會論文集[C];2006年

3 莫笑晗;秦西云;楊程;李天飛;吳建宇;陳海如;;煙草脈扭病毒外殼蛋白基因部分序列的克隆和分析[A];中國植物病理學會第七屆代表大會暨學術研討會論文摘要集[C];2002年

4 董書維;向海英;尚巧霞;韓成貴;李大偉;于嘉林;;南瓜溫和花葉病毒外殼蛋白大小亞基的原核表達及小亞基抗血清制備[A];中國植物病理學會2011年學術年會論文集[C];2011年

5 斯欽巴特爾;莫日根;哈斯阿古拉;張劍峰;;BNYVV CP基因的克隆及載體構建[A];2003年內蒙古自治區(qū)自然科學學術年會優(yōu)秀論文集[C];2003年

6 張艷敬;韓成貴;于嘉林;李大偉;;壞死病毒屬兩種病毒外殼蛋白在本生煙中的定位[A];中國植物病理學會2009年學術年會論文集[C];2009年

7 Ida Bagus Andika;孫麗英;孫炳劍;陳劍平;;中國小麥花葉病毒外殼蛋白的翻譯策略與小麥品種抗病性相關[A];中國植物病理學會2010年學術年會論文集[C];2010年

8 張曉峰;趙曉菲;張艷敬;牛少芳;韓成貴;于嘉林;Feng Qu;李大偉;;甜菜黑色焦枯病毒外殼蛋白N末端堿性氨基酸與病毒粒子穩(wěn)定性及其在本生煙中系統(tǒng)運動的關系[A];中國植物病理學會2012年學術年會論文集[C];2012年

9 張海龍;田兆豐;董志;張晏如;張飛云;;多花黑麥草斑駁病毒外殼蛋白基因在大腸桿菌中的表達[A];泛環(huán)渤海地區(qū)九省市生物化學與分子生物學會——2011年學術交流會論文集[C];2011年

10 韓美麗;李耿光;賀紅;張銀東;張?zhí)m英;;柑桔衰退病病毒外殼蛋白基因轉入枳殼及轉基因植株再生研究[A];2003年廣西植物生理學年會論文匯編[C];2003年

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7 鄧海濤;柑橘碎葉病毒外殼蛋白和運動蛋白在本氏煙中亞細胞定位研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2014年

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本文編號：2732237