【摘要】：不同的Wnt配體在牙齒發(fā)育過程中的上皮以及間充質(zhì)具有不同的時空表達(dá),然而,這些差異表達(dá)的Wnt配體在牙齒發(fā)育中的作用在之前的研究中并不明確。Wntless(Wls)功能的缺失會導(dǎo)致Wnt配體無法運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞外,因而Wls的條件性敲除小鼠近年來已經(jīng)成為研究Wnt配體功能的重要工具。在牙齒發(fā)育過程中,Shh特異性的在牙源性上皮特異性表達(dá),為了研究在牙齒上皮特異性表達(dá)的Wnt配體的功能,在本研究中,我們使用Shh-Cre來敲除牙齒上皮表達(dá)的Wls來進(jìn)行研究。我們發(fā)現(xiàn),使用Shh-Cre對Wls進(jìn)行條件性敲除WlsShh-Cre會導(dǎo)致牙齒分化缺陷,具體表現(xiàn)在成釉細(xì)胞和成牙本質(zhì)細(xì)胞的極性缺失,并缺乏分化標(biāo)志物(Dspp,Osterxi,Decorin,Colla1)的表達(dá),同時伴隨著牙本質(zhì)含量的顯著降低。我們進(jìn)一步使用Wnt信號通路的報告基因小鼠BAT-GAL小鼠來研究Wls敲除對經(jīng)典Wnt信號通路的影響,發(fā)現(xiàn)在E16.5 WlsShh-Cre小鼠牙齒中,Wnt信號通路活性在第二釉結(jié)明顯下調(diào),此外Wnt信號通路的靶基因Lef1,Axin2和Dkk1的表達(dá)顯著下調(diào)。以上結(jié)果就提示,WlsShh-Cre突變牙齒中的經(jīng)典的wnt信號通路活性下調(diào)。此外,我們發(fā)現(xiàn)Shh信號通路分子Shh,Ptc 和Gli1在E16.5的牙齒中的表達(dá)也顯著下調(diào)。我們還發(fā)現(xiàn),在E16.5天,Wls突變牙齒的上皮和間充質(zhì)中細(xì)胞增殖發(fā)生異常;然而細(xì)胞凋亡并沒有受到影響。通過染色質(zhì)免疫沉淀實驗我們發(fā)現(xiàn)成牙本質(zhì)細(xì)胞分化的關(guān)鍵標(biāo)志物Decorin和Colla1在牙齒發(fā)育過程中是Wnt信號通路的靶基因,它們在WlsShh-Cre牙齒中下調(diào)。此外,體外組織培養(yǎng)實驗也發(fā)現(xiàn),經(jīng)使用LiCl誘導(dǎo)Wnt信號通路活性可以導(dǎo)致Decorin和Colla1的表達(dá)在Wls突變牙齒中顯著增加。綜上所述,我們的研究結(jié)果表明,牙表皮來源的Wnt配體對牙齒分化有重要的調(diào)控作用。
【圖文】：

悘＿＿１：：：\l逡逑灥口孭＿逡逑圖１邋Ｗｌｓ介導(dǎo)的Ｗｎｔ在小鼠牙齒發(fā)育ＳＨＨ細(xì)胞系中影響。（圖１，Ａ－Ｃ，逡逑Ａ’－Ｃ’）：通過用組織學(xué)分析結(jié)果顯示，Ｗ／／＂Ａ—Ｄ＇＊Ｅ１４．５可以正常發(fā)展到帽逡逑狀期ＣＡＰ階段，但是突變體要比對照組牙齒顯示的小。在Ｅ１７．５天（圖１，逡逑Ｂ，Ｂ’；邋Ｃ，Ｃ’）和ｐＯ處的磨牙（圖１，Ｄ．Ｄ’）Ｍａｓｓｏｎ三色染色顯、示圫逡逑與對照組相比較尺寸變小，小鼠牙本質(zhì)基質(zhì)（箭頭方向）減少。Ｅ，逡逑Ｅ’；邋Ｆ，，邋Ｆ’：顯示了邋Ｃ，邋Ｃ’，Ｄ，Ｄ’方框內(nèi)區(qū)域的高倍放大率照片。比例尺：逡逑Ｂ－Ｄ，邋ＢＬＤ，，２００ｐｍ；Ｅ，Ｆ，邋Ｅ，，Ｆ，，邋５０叫１；其他的是邋１００叫１。逡逑２６逡逑

逡逑圖２．１原位雜交結(jié)果顯示在圫－？中（圖２．１，Ａ－Ｆ，Ａ’－Ｆ’）逡逑Ａｍｅｌｏｇｅｎｉｎ、Ｄｓｐｐ、Ｃｏｉｌｅｄ、Ｏｓｔｅｒｉｘ、Ｄｅｃｏｒｉｎ，Ｎｅｓｔｉｎ邋表達(dá)量飛悔．．ａ邋ａｍ，逡逑是成釉細(xì)胞；ｏｄ，是成牙細(xì)胞。逡逑ｃ逡逑．0邋Ａ邋Ａ邋邐逡逑＜／＞邋１邐W邋Ｃｏｎｌｒｏｌ逡逑￥邋１邋２邐ｍ邋Ｗｆｓ＾１１＾＇９逡逑ｌｌＵ．Ｕｉｌ？ｌｉｌ逡逑Ｚ邋＿１。壚妒邋ＤｓｐＰ邐Ｃ0＇１？Ａ邋0ｓｔｅ＾邋0ｅｃ0＾邋＾逡逑圖２．２邋Ｑ－ＰＣＲ方法分析對照組和Ｗ／／Ｗｉ＿ｃ＞ｅ小鼠在鼠ｐ0時Ａ；批／ｏｇｅ？／ｎ、逡逑Ｄｓ／７／？、Ｃ＜７Ｗａ＿／、（７你ｒ／ｘ、Ｄｅｃｏｒａ邋ａｍｉｉＶｅｓｔ／ｎ邋這幾個基因表達(dá)均降低。逡逑女邋Ｐ＜０．０５。逡逑２８逡逑
【學(xué)位授予單位】：杭州師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：Q95-33

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1 韓波;楊U

本文編號：2642029