發(fā)布時間：2023-10-30 18:35

　　本文主要研究不同濃度鐵離子對β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,β-Lg)糖基化及致敏性的影響。采用多光譜技術(shù)分析鐵離子介導(dǎo)的糖基化β-Lg結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)變化,間接競爭酶聯(lián)免疫(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)以及液相質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析β-Lg的致敏性和糖基化修飾特性。補充完善了鐵離子對β-Lg糖基化反應(yīng)體系和致敏性的影響,為加鐵乳粉工業(yè)中應(yīng)用糖基化技術(shù)提供理論指導(dǎo)。鐵離子影響的糖基化β-Lg的特性研究結(jié)果如下:(1)根據(jù)聚丙烯酰胺凝膠電泳(Polyacrylamide Gelelectrophoresis,SDS-PAGE)和飛行時間質(zhì)譜(Matrix-assisted laser desorption ionization Time of Flight,MALDI-TOF)實驗結(jié)果,顯示蛋白質(zhì)的分子量沒有發(fā)生明顯的改變,有少部分的蛋白質(zhì)分子發(fā)生聚集,這和蛋白質(zhì)的交聯(lián)和美拉德反應(yīng)有關(guān)。(2)根據(jù)光譜學(xué)分析顯示鐵離子對β-Lg的結(jié)構(gòu)有顯著性的影響,β-Lg二級結(jié)構(gòu)和三級結(jié)構(gòu)都有不同程度的展開。二級卷曲結(jié)構(gòu)變的緊密,并且趨向無規(guī)則化...

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
符號說明
第1章 引言
    1.1 概述
    1.2 課題來源
    1.3 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀
        1.3.1 β-Lg簡介及研究現(xiàn)狀
            1.3.1.1 β-Lg簡介
            1.3.1.2 β-Lg過敏研究現(xiàn)狀
            1.3.1.3 β-Lg的功能特性研究現(xiàn)狀
        1.3.2 糖基化反應(yīng)及其對蛋白質(zhì)的影響
        1.3.3 鐵離子催化系統(tǒng)及其研究進展
        1.3.4 生物質(zhì)譜技術(shù)在蛋白質(zhì)糖基化中的研究進展
    1.4 研究課題意義
    1.5 研究的主要內(nèi)容
    1.6 課題的創(chuàng)新之處
第2章 鐵離子促進糖基化對β-Lg結(jié)構(gòu)的影響研究
    2.1 概述
    2.2 實驗材料與試劑
    2.3 實驗儀器與設(shè)備
    2.4 試驗方法
        2.4.1 β-Lg處理及蛋白糖基化模型的建立
        2.4.2 色度的測定
        2.4.3 SDS-PAGE電泳
        2.4.4 MALDI-TOF檢測蛋白質(zhì)分子量
        2.4.5 內(nèi)源熒光的測定
        2.4.6 紫外光譜的測定
        2.4.7 圓二色光譜(CD)的測定
        2.4.8 核磁共振氫譜(1H NMR)測定
        2.4.9 紅外光譜測定
    2.5 結(jié)果與討論
        2.5.1 樣品的反應(yīng)程度及色度測定
            2.5.1.1 樣品反應(yīng)程度分析
            2.5.1.2 樣品的色度分析
        2.5.2 SDS-PAGE電泳分析
        2.5.3 MALDI-TOF分析分子量
        2.5.5 內(nèi)源熒光數(shù)據(jù)分析
        2.5.6 紫外吸收程度分析
        2.5.7 CD光譜分析
        2.5.8 核磁共振氫譜(¹H NMR)分析結(jié)果
        2.5.9 紅外光譜分析
    2.6 本章小結(jié)
第3章 鐵離子對β-Lg糖基化產(chǎn)物的影響
    3.1 概述
    3.2 實驗材料與試劑
    3.3 實驗儀器和設(shè)備
    3.4 實驗方法
        3.4.1 鐵離子對β-Lg氨基酸分子的影響
            3.4.1.1 自由氨基的測定
            3.4.1.2 羰基含量的測定
            3.4.1.3 巰基含量的測定
            3.4.1.4 氨基酸組成分析
        3.4.2 鐵離子對β-Lg抗氧化性影響
            3.4.2.1 還原力的測定
            3.4.2.2 DPPH·自由基清除能力
            3.4.2.3 亞鐵離子螯合能力
        3.4.3 糖基化產(chǎn)物的測定
    3.5 結(jié)果與討論
        3.5.1 鐵離子對β-Lg氨基酸的影響
            3.5.1.1 自由氨基含量的分析
            3.5.1.2 羰基含量的分析
            3.5.1.3 巰基含量的分析
            3.5.1.4 氨基酸組成分析
        3.5.2 鐵離子對糖基化β-Lg抗氧化性的影響
            3.5.2.1 還原力
            3.5.2.2 DPPH·自由基清除能力
            3.5.2.3 亞鐵離子螯合能力
        3.5.3 鐵離子對β-Lg糖基化產(chǎn)物的影響
            3.5.3.1 羧甲基賴氨酸(CML)含量分析
            3.5.3.2 類黑精含量分析
            3.5.3.3 丙烯酰胺含量分析
            3.5.3.4 羥甲基糠醛(HMF)含量分析
    3.6 本章小結(jié)
第4章 鐵離子對β-Lg糖基化位點及其致敏性的影響
    4.1 概述
    4.2 實驗材料與試劑
    4.3 實驗儀器與設(shè)備
    4.4 實驗方法
        4.4.1 鐵離子對糖基化β-Lg的致敏性影響
            4.4.1.1 抗原性的測定
            4.4.1.2 過敏原性的測定
        4.4.2 鐵離子對β-Lg糖基化位點的影響
            4.4.2.1 樣品的酶解
            4.4.2.2 質(zhì)譜分析
    4.5 結(jié)果與討論
        4.5.1 鐵離子對糖基化β-Lg致敏性的影響
            4.5.1.1 最適抗原包被、抗血清和酶標二抗?jié)舛鹊拇_定
            4.5.1.2 抗原性的分析
            4.5.1.3 過敏原性的分析
        4.5.2 β-Lg糖基化位點和糖基化程度分析
            4.5.2.1 糖基化位點的鑒定
            4.5.2.2 糖基化程度分析
        4.5.3 鐵離子促進糖基化修飾降低β-Lg致敏性機理分析
    4.6 本章小結(jié)
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
致謝
參考文獻
攻讀學(xué)位期間成果



本文編號：3858978