ω3多不飽和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acids,PUFA)是一種必需脂肪酸,其與ω6 PUFA的均衡攝入是健康的保證。然而西方化的飲食導致國民ω3 PUFA的膳食攝入相對于ω6 PUFA顯著不足。這種失衡與多種疾病的發(fā)生高度相關其中包括腫瘤。由于前列腺癌“慢性癌癥的特點”,營養(yǎng)支持和膳食干預不論是對于其預防、轉歸還是預后都有著尤為重要的意義。流行病學和本實驗室前期研究均提示:ω3 PUFA能顯著抑制前列腺炎癥,抑制前列腺腫瘤的生長,減緩前列腺癌發(fā)展并提高小鼠成活率,而ω6 PUFA卻是相反的效果。并且在ω3 PUFA中,二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic acid,DHA)對于人前列腺癌的抑制效應較強。這提示,以DHA為代表的ω3 PUFA在前列腺癌的預防和治療領域有重要應用價值。盡管已經(jīng)有一些研究報道了DHA抗炎和抗腫瘤的作用,但是相關機制研究的還很不足,本課題通過體內外研究發(fā)現(xiàn),DHA對于前列腺癌的抑制作用依賴于其氧化代謝過程,并至少通過兩個機制:1)DHA經(jīng)脂氧化酶(Lipoxygenase,LOX)氧化產(chǎn)生的D型消退素(Resolvin ...

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【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略符號對照表
第一章 緒論
    1.1 多不飽和脂肪酸的氧化
        1.1.1 PUFA與類二十/二十二烷酸代謝
        1.1.2 PUFA與脂質過氧化
    1.2 類二十/二十二烷酸與巨噬細胞炎癥
    1.3 鐵死亡
        1.3.1 脂質過氧化與鐵死亡
        1.3.2 鐵死亡相關信號通路
    1.4 立題意義與研究內容
        1.4.1 立題意義
        1.4.2 主要研究內容
第二章 膳食ω3多不飽和脂肪酸對小鼠前列腺癌的作用
    2.1 前言
    2.2 實驗材料與設備
        2.2.1 試劑
        2.2.2 細胞系與動物
        2.2.3 主要儀器和設備
    2.3 實驗方法
        2.3.1 小鼠組織石蠟切片的制作
        2.3.2 Western Blot
        2.3.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
    2.4 結果與討論
        2.4.1 膳食ω3PUFA對小鼠前列腺癌的作用
        2.4.2 膳食ω3 PUFA前列腺癌組織中的M2 巨噬細胞浸潤的作用
    2.5 本章小結
第三章 D型消退素對巨噬細胞極化的作用
    3.1 前言
    3.2 實驗材料與設備
        3.2.1 試劑
        3.2.2 細胞系與動物
        3.2.3 細胞培養(yǎng)用液
        3.2.4 主要儀器和設備
    3.3 實驗方法
        3.3.1 液質聯(lián)用分析
        3.3.2 巨噬細胞極化
        3.3.3 MTT細胞計數(shù)實驗
        3.3.4 流式細胞術
        3.3.5 RNA提取與q PCR
        3.3.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
    3.4 結果與討論
        3.4.1 組織中存在Rv D及 Rv D所需的代謝酶類
        3.4.2 DHA和 Rv D借助巨噬細胞抑制前列腺癌細胞增殖
        3.4.3 RvD作用于腫瘤相關巨噬細胞抑制前列腺癌細胞增殖
        3.4.4 Rv D對 TAM極化的作用
        3.4.5 RvD對M2a極化的作用
        3.4.6 RvD對M1極化的作用
    3.5 本章小結
第四章 Rv D對巨噬細胞PKA通路的調節(jié)作用
    4.1 前言
    4.2 實驗材料與設備
        4.2.1 試劑
        4.2.2 主要儀器和設備
    4.3 實驗方法
        4.3.1 RNA提取與q PCR
        4.3.2 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
    4.4 結果與討論
        4.4.1 RvD受體在不同極化狀態(tài)的巨噬細胞的表達
        4.4.2 不同極化狀態(tài)的巨噬細胞中Rv D對 PKA通路的調控
        4.4.3 PKA通路對巨噬細胞極化的作用
    4.5 本章小結
第五章 二十二碳六烯酸對細胞鐵死亡的作用
    5.1 前言
    5.2 實驗材料與設備
        5.2.1 試劑
        5.2.2 細胞系與動物
        5.2.3 培養(yǎng)基
        5.2.4 主要儀器和設備
    5.3 實驗方法
        5.3.1 液質聯(lián)用分析
        5.3.2 氣質聯(lián)用分析
        5.3.3 小干擾RNA的轉染
        5.3.4 流式細胞術檢測胞內ROS與 LPO
        5.3.5 流式細胞術檢測凋亡指標
        5.3.6 經(jīng)典生化反應
        5.3.7 裸鼠成瘤實驗
        5.3.8 免疫熒光
        5.3.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
    5.4 結果與討論
        5.4.1 人體組織與培養(yǎng)的細胞中脂肪酸的含量
        5.4.2 不同的脂肪酸對鐵死亡誘導劑介導的細胞死亡的作用
        5.4.3 不同飽和度脂肪酸對FIN相關細胞死亡的調控
        5.4.4 DHA對 FIN介導的細胞死亡對非腫瘤細胞的效應
        5.4.5 DHA與 FIN介導的細胞死亡方式
        5.4.6 DHA對鐵死亡特異性的ROS積累的作用
        5.4.7 鐵死亡過程中胞內多層次的氧化作用
        5.4.8 DHA對體內鐵死亡依賴的腫瘤治療作用
    5.5 本章小結
第六章 DHA在胞內發(fā)生脂質過氧化的機制
    6.1 前言
    6.2 實驗材料與設備
        6.2.1 試劑
        6.2.2 主要儀器和設備
    6.3 實驗方法
        6.3.1 薄層層析
        6.3.2 ALOX5代謝產(chǎn)物檢測與脂質組學
        6.3.3 RT-PCR方法檢測ACSL與 LPCAT的表達
        6.3.4 質粒的轉染
        6.3.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
    6.4 結果與討論
        6.4.1 DHA的添加對細胞脂質組成的影響
        6.4.2 DHA的作用不依賴于其受體GPR120
        6.4.3 游離DHA對鐵死亡的作用
        6.4.4 鐵死亡的ROS與 LPO的積累
        6.4.5 COX與 LOX途徑在DHA參與的鐵死亡中的作用
    6.5 本章小結
第七章 RIPK1對DHA參與的鐵死亡的作用
    7.1 前言
    7.2 實驗材料與設備
        7.2.1 試劑
    7.3 實驗方法
        7.3.1 質粒的轉染
        7.3.2 免疫共沉淀
        7.3.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
    7.4 結果與討論
        7.4.1 DHA介導的鐵死亡特征
        7.4.2 RIPK1抑制劑對鐵死亡的作用
        7.4.3 鐵死亡中RIPK1的磷酸化
        7.4.4 RIPK1各個位點的功能
        7.4.5 RIPK1的激酶活性對鐵死亡的作用
        7.4.6 RIPK1沒有形成經(jīng)典的壞死復合體
        7.4.7 SQSTM1/p62與RIPK1 的結合
    7.5 本章小結
第八章 RIPK1-SQSTM1/p62-GSDMD對 DHA參與的鐵死亡的作用
    8.1 前言
    8.2 實驗材料與設備
        8.2.1 試劑
        8.2.2 主要儀器和設備
    8.3 實驗方法
        8.3.1 蛋白質譜鑒定
        8.3.2 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
    8.4 結果與討論
        8.4.1 DHA參與的鐵死亡中SQSTM1/p62 的磷酸化
        8.4.2 DHA參與的鐵死亡中SQSTM1/p62 的胞內聚集
        8.4.3 SQSTM1/p62對DHA參與的鐵死亡的作用
        8.4.4 RIPK1對SQSTM1/p62 的磷酸化的調控
        8.4.5 自噬在鐵死亡中的作用
        8.4.6 GSDMD與 RIPK1和SQSTM1/p62 的相互作用
        8.4.7 GSDMD對鐵死亡的作用
        8.4.8 RIPK1與SQSTM1/p62對GSDMD活化的調控
        8.4.9 CASP5在鐵死亡中的作用
        8.4.10 RIPK1對CASP5 活化的調控
    8.5 本章小結
主要結論與展望
    主要結論
    展望
論文創(chuàng)新點
致謝
參考文獻
附錄Ⅰ:作者在攻讀博士學位期間發(fā)表的論文
附錄Ⅱ:Co-IP方法鑒定的與SQSTM1/p62或RIPK1 結合的蛋白質



本文編號：3857230