隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展,以淀粉為底物制備的功能性糖等新型產(chǎn)品深受消費(fèi)者喜愛。低聚異麥芽糖(Isomalto-oligosaccharides,IMOs)是一種益生元,甜度低熱量低,保濕性強(qiáng),能被雙歧桿菌等有益菌利用,有改善腸道微生物菌群等作用,并且長(zhǎng)鏈IMOs的益生元效果優(yōu)于短鏈IMOs。IMOs有諸多優(yōu)點(diǎn),可以作為食品添加劑添加到食品、藥物及飼料中。α-葡萄糖苷酶是IMOs制備中的關(guān)鍵酶,而黑曲霉來源的α-葡萄糖苷酶對(duì)短鏈底物具有特異性,對(duì)作用于麥芽三糖有更高的k_cat/K_m值。因此本研究選用能特異性產(chǎn)生麥芽三糖的麥芽三糖生成酶,加入到利用淀粉制備IMOs的糖化反應(yīng)中,為黑曲霉α-葡萄糖苷酶提供更多的麥芽三糖底物。本課題將來源于Thermobifida fusca NTU22的麥芽三糖生成酶編碼基因經(jīng)過畢赤酵母密碼子優(yōu)化及全基因合成后,成功將麥芽三糖生成酶固定在畢赤酵母GS115細(xì)胞壁上,構(gòu)建成重組菌株。測(cè)定其具有特異性生成麥芽三糖的能力,分析其酶學(xué)性質(zhì)及重復(fù)批次利用性,并以麥芽糊精為底物制備麥芽三糖。同時(shí),將表面展示麥芽三糖生成酶全細(xì)胞催化劑...

【文章頁(yè)數(shù)】：77 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞表
第一章 緒論
    1.1 麥芽三糖生成酶
        1.1.1 麥芽三糖生成酶結(jié)構(gòu)及作用方式
        1.1.2 麥芽三糖生成酶來源及表達(dá)
        1.1.3 麥芽三糖生成酶的應(yīng)用
    1.2 α-葡萄糖苷酶
        1.2.1 α-葡萄糖苷酶的結(jié)構(gòu)及催化機(jī)制
        1.2.2 α-葡萄糖苷酶的應(yīng)用
        1.2.3 α-葡萄糖苷酶的研究現(xiàn)狀
    1.3 低聚異麥芽糖
        1.3.1 低聚異麥芽糖的特性及功能
        1.3.2 低聚異麥芽糖的生產(chǎn)
    1.4 畢赤酵母細(xì)胞表面展示系統(tǒng)
        1.4.1 畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)
        1.4.2 影響酵母細(xì)胞表面展示的因素
        1.4.3 畢赤酵母細(xì)胞表面展示的應(yīng)用
    1.5 本課題研究意義及主要研究?jī)?nèi)容
        1.5.1 本課題的研究意義
        1.5.2 本課題的主要研究?jī)?nèi)容
第二章 Thermobifida fusca NTU22 麥芽三糖生成酶在畢赤酵母的表面展示
    2.1 引言
    2.2 材料與儀器
        2.2.1 菌株和質(zhì)粒
        2.2.2 主要儀器和設(shè)備
        2.2.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2.4 培養(yǎng)基與溶液
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 菌株的培養(yǎng)方法
        2.3.2 菌株的保存方法
        2.3.3 重組質(zhì)粒p PIC9K-tfa-flag-GCW61 的構(gòu)建
        2.3.4 重組畢赤酵母菌株的構(gòu)建與篩選
        2.3.5 重組菌株表面展示麥芽三糖生成酶的甲醇誘導(dǎo)表達(dá)
        2.3.6 全細(xì)胞催化劑的制備
        2.3.7 全細(xì)胞催化劑的酶活測(cè)定和酶學(xué)性質(zhì)分析
        2.3.8 表面展示麥芽三糖生成酶多批次重復(fù)利用性分析
        2.3.9 麥芽三糖生成酶全細(xì)胞催化劑制備麥芽三糖
        2.3.10 高效液相色譜檢測(cè)方法
        2.3.11 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    2.4 結(jié)果討論
        2.4.1 表面展示重組質(zhì)粒p PIC9K-tfa-flag-GCW61 的構(gòu)建
        2.4.2 重組畢赤酵母菌株的構(gòu)建與篩選
        2.4.3 重組畢赤酵母菌株的甲醇誘導(dǎo)表達(dá)
        2.4.4 全細(xì)胞催化劑的活力測(cè)定及酶學(xué)性質(zhì)分析
        2.4.5 全細(xì)胞催化劑Pp-TFA-GCW61 的重復(fù)利用性
        2.4.6 全細(xì)胞催化劑用于制備麥芽三糖分析
    2.5 本章小結(jié)
第三章 表面展示麥芽三糖生成酶參與催化合成低聚異麥芽糖的研究
    3.1 引言
    3.2 設(shè)備與材料
        3.2.1 主要儀器和設(shè)備
        3.2.2 主要材料
        3.2.3 溶液配制
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 全細(xì)胞催化劑Pp-TFA-GCW61及Pp-ANGL-GCW(21+19)的制備
        3.3.2 酶活定義
        3.3.3 Pp-TFA-GCW61 參與催化合成低聚異麥芽糖
        3.3.4 2L反應(yīng)釜內(nèi)制備低聚異麥芽糖
        3.3.5 高效液相色譜檢測(cè)方法
        3.3.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    3.4 結(jié)果討論
        3.4.1 HPLC-ELSD測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品
        3.4.2 表面展示麥芽三糖生成酶對(duì)低聚異麥芽糖合成的影響
        3.4.3 2L反應(yīng)釜內(nèi)制備低聚異麥芽糖
    3.5 本章小結(jié)
結(jié)論與展望
    結(jié)論
    本論文創(chuàng)新點(diǎn)
    展望
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
附件



本文編號(hào)：3854943