發(fā)布時(shí)間：2023-10-15 16:13

　　食品組分的相互作用是食品領(lǐng)域重要科學(xué)問題,引起了廣泛的關(guān)注。燕麥牛奶由于含有豐富的營養(yǎng)價(jià)值,越來越受到人們的喜愛,其中的組分不可避免會發(fā)生相互作用,它們對食物營養(yǎng)品質(zhì)和安全性的影響尚未有研究報(bào)道。燕麥生物堿B和β-乳球蛋白分別為燕麥和牛奶中重要的物質(zhì)成分,這兩成分之間是否會發(fā)生相互作用,對彼此的生理活性是否會產(chǎn)生影響是本研究的重點(diǎn)。本論文研究選取燕麥生物堿B和牛乳中β-乳球蛋白為研究對象,主要研究內(nèi)容為通過紫外吸收光譜和熒光光譜研究二者之間的相互作用,并通過RBL-2H3細(xì)胞脫顆粒模型,探究β-乳球蛋白對燕麥生物堿B抑制細(xì)胞脫顆粒的影響,以及通過KU812細(xì)胞脫顆粒模型,探究燕麥生物堿B與β-乳球蛋白復(fù)合物對細(xì)胞脫顆粒的影響。主要研究結(jié)果如下:(1)通過紫外吸收光譜和熒光吸收光譜實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,燕麥生物堿B以靜態(tài)猝滅的方式引起β-乳球蛋白的熒光猝滅,靜態(tài)猝滅機(jī)制條件下,計(jì)算得出結(jié)合位點(diǎn)數(shù)n位于0.5附近,說明燕麥生物堿B與β-乳球蛋白以2:1的比例形成復(fù)合物。(2)120μM燕麥生物堿B、60μM、120μM、240μM的β-乳球蛋白和按照濃度比0.5∶1、1∶1、2∶1形成的復(fù)合物作用...

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 緒論
    1.1 燕麥生物堿的組成
        1.1.1 燕麥生物堿的分類
        1.1.2 燕麥生物堿的結(jié)構(gòu)
    1.2 燕麥生物堿的生理活性
        1.2.1 抗氧化作用
        1.2.2 抗炎作用
        1.2.3 抑制細(xì)胞增殖活性
    1.3 牛乳蛋白的結(jié)構(gòu)
        1.3.1 牛乳蛋白的種類
        1.3.2 酪蛋白結(jié)構(gòu)
        1.3.3 乳清蛋白結(jié)構(gòu)
    1.4 小分子化合物與蛋白質(zhì)相互作用的研究方法
        1.4.1 光譜法
        1.4.2 質(zhì)譜法
        1.4.3 分子模擬對接技術(shù)
    1.5 生物堿與蛋白質(zhì)相互作用研究現(xiàn)狀
        1.5.1 喹啉類生物堿與蛋白質(zhì)相互作用
        1.5.2 吲哚類生物堿與蛋白質(zhì)的相互作用
        1.5.3 吡啶類生物堿與蛋白質(zhì)相互作用
        1.5.4 哌啶類生物堿與蛋白質(zhì)相互作用
    1.6 肥大細(xì)胞
        1.6.1 引發(fā)肥大細(xì)胞脫顆粒作用的機(jī)制
        1.6.2 IgE/FcεRI介導(dǎo)的肥大細(xì)胞脫顆粒活性物質(zhì)
        1.6.3 IgE/FcεRI介導(dǎo)肥大細(xì)胞脫顆粒的信號通路
    1.7 立體背景與研究內(nèi)容
        1.7.1 立題背景
        1.7.2 研究內(nèi)容
第2章 燕麥生物堿B與β-乳球蛋白相互作用的研究
    2.1 引言
    2.2 材料與試劑
    2.3 儀器與設(shè)備
    2.4 溶液配制
    2.5 實(shí)驗(yàn)方法
    2.6 結(jié)果與分析
        2.6.1 燕麥生物堿B對 β-乳球蛋白的紫外吸收光譜的影響
        2.6.2 燕麥生物堿B對 β-乳球蛋白的熒光光譜的影響
        2.6.3 燕麥生物堿B與 β-乳球蛋白相互作用的熒光猝滅類型
        2.6.4 燕麥生物堿B與 β-乳球蛋白的結(jié)合常數(shù)與結(jié)合位點(diǎn)數(shù)
    2.7 討論
        2.7.1 燕麥生物堿B對 β-乳球蛋白紫外吸收光譜的影響
        2.7.2 燕麥生物堿B對 β-乳球蛋白內(nèi)源性熒光的影響
    2.8 小結(jié)
第3章 燕麥生物堿B與 β-乳球蛋白復(fù)合物對大鼠嗜堿性粒細(xì)胞RBL-2H3 脫顆粒的影響
    3.1 引言
    3.2 材料與試劑
    3.3 儀器與設(shè)備
    3.4 溶液配制
    3.5 實(shí)驗(yàn)方法
        3.5.1 RBL-2H3 細(xì)胞的復(fù)蘇
        3.5.2 RBL-2H3 細(xì)胞的傳代培養(yǎng)
        3.5.3 RBL-2H3 細(xì)胞的凍存
        3.5.4 β-乳球蛋白與燕麥生物堿B復(fù)合物溶液的制備
        3.5.5 RBL-2H3 細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)
        3.5.6 IgE介導(dǎo)的RBL-2H3 細(xì)胞體外活化實(shí)驗(yàn)
        3.5.7 β-HEX的檢測
        3.5.8 組胺含量的檢測
        3.5.9 IL-6 含量的檢測
        3.5.10 TNF-α含量的檢測
        3.5.11 Western Blot 法檢測 RBL-2H3 細(xì)胞信號通路中 P-Lyn、Lyn、P-JNK、JNK 及 MAPK 家族蛋白的表達(dá)情況
        3.5.12 數(shù)據(jù)分析
    3.6 結(jié)果與分析
        3.6.1 燕麥生物堿B、β-乳球蛋白以及復(fù)合物對RBL-2H3 細(xì)胞毒性的影響
        3.6.2 燕麥生物堿B、β-乳球蛋白以及復(fù)合物對RBL-2H3 細(xì)胞β-HEX釋放的影響
        3.6.3 燕麥生物堿B、β-乳球蛋白以及復(fù)合物對RBL-2H3 細(xì)胞組胺釋放的影響
        3.6.4 燕麥生物堿B、β-乳球蛋白以及復(fù)合物對RBL-2H3 細(xì)胞IL-6 釋放的影響
        3.6.5 燕麥生物堿B、β-乳球蛋白以及復(fù)合物對RBL-2H3 細(xì)胞TNF-α釋放的影響
        3.6.6 酪氨酸激酶Lyn介導(dǎo)的信號通路中關(guān)鍵蛋白的表達(dá)檢測
    3.7 討論
        3.7.1 燕麥生物堿B、β-乳球蛋白以及復(fù)合物對RBL-2H3 細(xì)胞的增殖毒性作用
        3.7.2 燕麥生物堿B、β-乳球蛋白以及復(fù)合物影響RBL-2H3 細(xì)胞脫顆粒和炎癥因子的變化
        3.7.3 燕麥生物堿B、β-乳球蛋白以及復(fù)合物影響酪氨酸激酶Lyn介導(dǎo)的信號通路中關(guān)鍵蛋白的表達(dá)
    3.8 小結(jié)
第4章 燕麥生物堿 B 與 β-乳球蛋白復(fù)合物對嗜堿性粒細(xì)胞KU812 脫顆粒的影響
    4.1 引言
    4.2 材料與試劑
    4.3 儀器與設(shè)備
    4.4 溶液配制
    4.5 實(shí)驗(yàn)方法
        4.5.1 牛乳過敏患者血清池的構(gòu)建
        4.5.2 KU812 細(xì)胞的凍存
        4.5.3 KU812 細(xì)胞的復(fù)蘇
        4.5.4 KU812 細(xì)胞的傳代
        4.5.5 β-乳球蛋白與燕麥生物堿B復(fù)合物溶液的制備
        4.5.6 KU812 細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)
        4.5.7 IgE介導(dǎo)的KU812 細(xì)胞體外活化實(shí)驗(yàn)
        4.5.8 β-HEX的檢測
        4.5.9 組胺含量的檢測
        4.5.10 IL-6 含量的檢測
        4.5.11 TNF-α含量的檢測
        4.5.12 Western Blot 法檢測 KU812 細(xì)胞信號通路中 P-Lyn、Lyn、P-JNK、JNK 及 MAPK 家族蛋白的表達(dá)情況
        4.5.13 數(shù)據(jù)分析
    4.6 結(jié)果與分析
        4.6.1 β-乳球蛋白、燕麥生物堿B及其復(fù)合物對KU812 細(xì)胞增殖毒性的影響
        4.6.2 β-乳球蛋白與燕麥生物堿B復(fù)合物對KU812 細(xì)胞釋放β-HEX的影響
        4.6.3 β-乳球蛋白與燕麥生物堿B復(fù)合物對KU812 細(xì)胞釋放組胺的影響
        4.6.4 β-乳球蛋白與燕麥生物堿B復(fù)合物對KU812 細(xì)胞釋放IL-6 的影響
        4.6.5 β-乳球蛋白與燕麥生物堿B復(fù)合物對KU812 細(xì)胞釋放TNF-α的影響
        4.6.6 免疫印跡法檢測抗原誘導(dǎo)KU812 細(xì)胞活化脫顆粒時(shí)Lyn介導(dǎo)的信號通路中關(guān)鍵蛋白的表達(dá)
    4.7 討論
        4.7.1 燕麥生物堿B、β-乳球蛋白以及復(fù)合物對KU812 細(xì)胞的增殖毒性作用
        4.7.2 燕麥生物堿B、β-乳球蛋白以及復(fù)合物影響KU812 細(xì)胞脫顆粒和炎癥因子的變化
        4.7.3 燕麥生物堿B、β-乳球蛋白以及復(fù)合物影響KU812 細(xì)胞活化脫顆粒過程中酪氨酸激酶Lyn介導(dǎo)的信號通路中關(guān)鍵蛋白的表達(dá)
    4.8 小結(jié)
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 創(chuàng)新點(diǎn)
    5.3 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間研究成果



本文編號：3854235