葡萄籽原花青素(GSP),由不同聚合度的黃烷三醇組成,是一種天然食品抗氧化劑。天然原花青素(PC)是一類親水性強(qiáng)而親脂性較弱的多羥基衍生物,難以應(yīng)用于富含油脂的食品體系。為了改善GSP的親脂性,本文先研究其特征化合物——黃烷三醇,采用化學(xué)法和酶法酯化黃烷三醇,得到親脂性黃烷三醇酯化產(chǎn)物;以酶法酯化得到的黃烷三醇衍生物為研究對象,對其分離純化及結(jié)構(gòu)鑒定,確定其酯化位點(diǎn);通過酶法脂化GSP得到脂溶性GSP(GSP-o),對其急性毒理性、抗氧化活性和油炸穩(wěn)定性進(jìn)行了評價,并研究了其抑制丙烯酰胺形成的機(jī)理和對人前列腺癌細(xì)胞的抑制及作用機(jī)制。主要結(jié)果如下:(1)以黃烷三醇(兒茶素、表兒茶素、表沒食子兒茶素和表兒茶素沒食子酸酯)為底物進(jìn)行化學(xué)法酯化反應(yīng),考查脂肪酰氯的碳鏈長度、反應(yīng)溶劑、反應(yīng)溫度和反應(yīng)時間對黃烷三醇化學(xué)法酯化的影響,確定黃烷三醇化學(xué)法酯化反應(yīng)的參數(shù)為5 mg黃烷三醇與5 mg棕櫚酰氯在乙酸乙酯中混合均勻,加入碳酸氫鈉,40℃反應(yīng)10 h。通過HPLC-MS分析,發(fā)現(xiàn)黃烷三醇化學(xué)法酯化產(chǎn)物有多個酯化峰,成分復(fù)雜。通過化學(xué)法酯化反應(yīng),黃烷三醇的脂溶性顯著提高,但抗氧化性有所降低。(2)...

【文章頁數(shù)】：145 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 葡萄籽原花青素
        1.1.1 化學(xué)結(jié)構(gòu)
        1.1.2 溶解性
        1.1.3 生物利用度
        1.1.4 生物活性
    1.2 結(jié)構(gòu)修飾
        1.2.1 化學(xué)法修飾
        1.2.2 酶法修飾
    1.3 丙烯酰胺的形成和抑制
        1.3.1 丙烯酰胺的形成
        1.3.2 丙烯酰胺的危害
        1.3.3 丙烯酰胺的抑制
    1.4 本研究的立題依據(jù)和意義
    1.5 本研究的整體技術(shù)路線圖
    參考文獻(xiàn)
第二章 黃烷三醇的化學(xué)法酯化修飾
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        2.2.1 主要材料與試劑
        2.2.2 主要儀器和設(shè)備
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 化學(xué)法酯化反應(yīng)
        2.3.2 化學(xué)法酯化產(chǎn)物的HPLC-MS分析
        2.3.3 化學(xué)法酯化產(chǎn)物的油水分配系數(shù)測定
        2.3.4 化學(xué)法酯化產(chǎn)物的抗氧化活性測定
    2.4 結(jié)果與討論
        2.4.1 脂肪酰氯的選擇
        2.4.2 反應(yīng)溶劑的選擇
        2.4.3 反應(yīng)溫度對黃烷三醇化學(xué)法酯化的影響
        2.4.4 反應(yīng)時間對黃烷三醇化學(xué)法酯化的影響
        2.4.5 化學(xué)法酯化產(chǎn)物的HPLC-MS檢測
        2.4.6 化學(xué)法酯化產(chǎn)物的油水分配系數(shù)
        2.4.7 化學(xué)法酯化產(chǎn)物的抗氧化活性測定
    2.5 本章小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第三章 黃烷三醇的酶法酯化修飾
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        3.2.1 主要材料與試劑
        3.2.2 主要儀器和設(shè)備
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 酶法酯化反應(yīng)
        3.3.2 酶法酯化產(chǎn)物的HPLC-MS/MS分析
        3.3.3 酶法酯化產(chǎn)物的純化
        3.3.4 酶法酯化產(chǎn)物的NMR分析
        3.3.5 酶法酯化產(chǎn)物的油水分配系數(shù)測定
        3.3.6 酶法酯化產(chǎn)物的抗氧化活性測定
    3.4 結(jié)果與討論
        3.4.1 脂肪酶的選擇
        3.4.2 脂肪酸的選擇
        3.4.3 反應(yīng)溶劑的選擇
        3.4.4 脂肪酶添加量對黃烷三醇酶法酯化的影響
        3.4.5 反應(yīng)溫度對黃烷三醇酶法酯化的影響
        3.4.6 反應(yīng)時間對黃烷三醇酶法酯化的影響
        3.4.7 底物質(zhì)量比對黃烷三醇酶法酯化的影響
        3.4.8 酶法酯化產(chǎn)物的HPLC-MS/MS檢測
        3.4.9 酶法酯化產(chǎn)物的NMR檢測
        3.4.10 酶法酯化產(chǎn)物的油水分配系數(shù)
        3.4.11 酶法酯化產(chǎn)物的抗氧化活性
    3.5 本章小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第四章 脂溶性葡萄籽原花青素的制備
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        4.2.1 主要材料與試劑
        4.2.2 主要儀器和設(shè)備
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 GSP的酶法酯化
        4.3.2 原花青素含量的測定
        4.3.3 GSP-o的總酚含量測定
        4.3.4 GSP-o的總黃酮含量測定
        4.3.5 GSP-o的油水分配系數(shù)測定
        4.3.6 GSP-o的紅外透射光譜
        4.3.7 GSP-o的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(HPLC-MS/MS)分析
        4.3.8 GSP-o的純化
        4.3.9 GSP-o的 NMR分析
    4.4 結(jié)果與討論
        4.4.1 GSP酶法酯化條件優(yōu)化
        4.4.2 GSP-o的總酚和黃酮含量
        4.4.3 GSP-o的親脂性
        4.4.4 GSP-o的紅外透射光譜
        4.4.5 GSP-o的鑒定
        4.4.6 GSP-o的結(jié)構(gòu)闡釋
    4.5 本章小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第五章 脂溶性葡萄籽原花青素的急性毒理性、抗氧化活性和油炸穩(wěn)定性評價
    5.1 引言
    5.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        5.2.1 主要材料與試劑
        5.2.2 主要儀器和設(shè)備
    5.3 實(shí)驗(yàn)方法
        5.3.1 小鼠急性口服毒性試驗(yàn)
        5.3.2 DPPH自由基清除能力測定
        5.3.3 ABTS自由基清除能力測定
        5.3.4 ORAC法測定
        5.3.5 油脂氧化穩(wěn)定性測定
        5.3.6 油品品質(zhì)的測定
    5.4 結(jié)果與討論
        5.4.1 GSP-o的急性口服毒性
        5.4.2 GSP-o的抗氧化活性
        5.4.3 GSP-o添加量對棕櫚油氧化穩(wěn)定性的影響
        5.4.4 不同抗氧化劑對棕櫚油氧化穩(wěn)定性的影響
        5.4.5 不同抗氧化劑對棕櫚油總極性化合物(TPC)的影響
        5.4.6 不同抗氧化劑對棕櫚油游離脂肪酸(FFA)的影響
        5.4.7 不同抗氧化劑對棕櫚油過氧化值(PV)和茴香胺值(p-AV)的影響
        5.4.8 不同抗氧化劑對棕櫚油脂肪酸組成(FC)的影響
    5.5 本章小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第六章 脂溶性葡萄籽原花青素抑制油炸食品中丙烯酰胺形成的研究
    6.1 引言
    6.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        6.2.1 主要材料與試劑
        6.2.2 主要儀器和設(shè)備
    6.3 實(shí)驗(yàn)方法
        6.3.1 薯片和薯?xiàng)l的制備
        6.3.2 樣品的預(yù)處理和丙烯酰胺的測定
        6.3.3 還原糖、天冬酰胺和3-APA的測定
        6.3.4 油品品質(zhì)的測定
        6.3.5 感官評價
    6.4 結(jié)果與討論
        6.4.1 GSP-o添加量對薯片和薯?xiàng)l中丙烯酰胺含量的影響
        6.4.2 不同親脂性抗氧化劑對丙烯酰胺抑制作用的影響
        6.4.3 不同親脂性抗氧化劑對油品品質(zhì)的影響
        6.4.4 GSP-o抑制丙烯酰胺形成的機(jī)理
        6.4.5 薯片和薯?xiàng)l的感官評價
    6.5 本章小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第七章 脂溶性葡萄籽原花青素對人前列腺癌細(xì)胞的抑制及作用機(jī)制研究
    7.1 引言
    7.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        7.2.1 主要材料與試劑
        7.2.2 主要儀器和設(shè)備
    7.3 實(shí)驗(yàn)方法
        7.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        7.3.2 MTT測定和細(xì)胞增殖分析
        7.3.3 流式細(xì)胞儀分析GSP-o對細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期的影響
        7.3.4 免疫印跡分析
        7.3.5 小鼠模型
        7.3.6 免疫熒光染色
        7.3.7 統(tǒng)計分析
    7.4 結(jié)果與討論
        7.4.1 GSP-o對人前列腺癌細(xì)胞活力的影響
        7.4.2 GSP-o誘導(dǎo)PC3 人前列腺癌細(xì)胞凋亡
        7.4.3 GSP-o對 PC3 細(xì)胞周期的影響
        7.4.4 GSP-o影響PC3 細(xì)胞中Cyclin D1、CDK4 和腫瘤抑制因子的表達(dá)
        7.4.5 GSP-o引起的細(xì)胞凋亡涉及PC3 細(xì)胞中的caspase-9,caspase-3和PARP的裂解
        7.4.6 GSP-o對 PC3 細(xì)胞液中細(xì)胞色素c釋放的影響
        7.4.7 GSP-o對 PC3 細(xì)胞Bcl-2/Bax比值的影響
        7.4.8 GSP-o在小鼠模型中阻斷前列腺癌的生長
    7.5 本章小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
結(jié)論與展望
攻讀博士學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
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本文編號：3853084