硒是人體必需的微量元素之一,適當(dāng)?shù)奈a(bǔ)充對(duì)人體健康具有積極作用。亞硒酸鈉等無(wú)機(jī)態(tài)硒補(bǔ)充劑是目前常見(jiàn)的硒補(bǔ)充劑,但它們的生物利用率較低,毒副作用較大,應(yīng)用的局限性是顯而易見(jiàn)的。因此,通過(guò)生物轉(zhuǎn)化的方式,將無(wú)機(jī)態(tài)硒轉(zhuǎn)變成有機(jī)態(tài)硒,是硒補(bǔ)充劑研制的有效途徑。本研究在課題組前期研究的基礎(chǔ)上,以亞硒酸鈉為硒源,利用大豆對(duì)硒進(jìn)行富集和轉(zhuǎn)化,制得富硒大豆蛋白,然后再采用蛋白酶對(duì)富硒大豆蛋白進(jìn)行酶解,制備富硒大豆肽(Selenium-enriched Soybean Peptide,SSP)并對(duì)SSP的組成結(jié)構(gòu)進(jìn)行了初步表征,對(duì)SSP的急性毒性及體內(nèi)外抗氧化能力進(jìn)行評(píng)價(jià)。本論文的主要研究結(jié)果與結(jié)論如下:1.富硒大豆蛋白酶解液的最佳脫鹽條件:樣品pH=3、溫度為25℃、樹(shù)脂與樣品體積比等于0.2、吸附時(shí)間為2h、洗脫溶劑為50%乙醇,此條件下SSP得率為73.78%,脫鹽率為94.51%,可制得總硒含量為40.75mg/kg的SSP。2.各種表征手段顯示,SSP以酸性氨基酸為主,相對(duì)分子質(zhì)量主要在612Da-1422Da之間;SSP經(jīng)過(guò)酶解失去了大分子蛋白質(zhì)的立體結(jié)構(gòu),而二級(jí)結(jié)構(gòu)相對(duì)較完整,以α-螺旋為...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 引言
    1.1 氧化對(duì)機(jī)體的意義與危害
    1.2 抗氧化劑
    1.3 硒抗氧化作用的研究現(xiàn)狀
        1.3.1 硒的概述
        1.3.2 硒補(bǔ)充劑抗氧化研究現(xiàn)狀
    1.4 硒對(duì)機(jī)體的其他作用
    1.5 硒的毒性
    1.6 研究意義
    1.7 研究?jī)?nèi)容
        1.7.1 SSP的制備
        1.7.2 SSP的理化性質(zhì)與結(jié)構(gòu)
        1.7.3 SSP對(duì)小鼠的急性毒性評(píng)價(jià)與硒的代謝分布
        1.7.4 SSP體外清除自由基的能力及對(duì)HepG2細(xì)胞的作用
        1.7.5 SSP對(duì) HFD致大鼠肝損傷的氧化保護(hù)作用
第二章 SSP的制備與結(jié)構(gòu)
    2.1 前言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)原料
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.3 試劑的配制
    2.4 實(shí)驗(yàn)方法
        2.4.1 富硒大豆蛋白的制備
            2.4.1.1 大豆富硒
            2.4.1.2 富硒大豆蛋白的提取
        2.4.2 富硒大豆蛋白粉脫脂
        2.4.3 SSP的制備
        2.4.4 SSP脫鹽
            2.4.4.1 大孔吸附樹(shù)脂預(yù)處理
            2.4.4.2 DA201-C大孔吸附樹(shù)脂靜態(tài)吸附動(dòng)力試驗(yàn)
            2.4.4.3 解吸劑濃度的選擇
            2.4.4.4 樹(shù)脂用量對(duì)吸附效果和脫鹽率的影響
            2.4.4.5 pH對(duì)吸附效果和脫鹽率的影響
            2.4.4.6 溫度對(duì)吸附效果和脫鹽率的影響
            2.4.4.7 肽得率的測(cè)定方法
        2.4.5 基本成分測(cè)定
        2.4.6 G-25凝膠層析分離SSP
        2.4.7 性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析
            2.4.7.1 掃描電鏡分析
            2.4.7.2 傅里葉變換紅外光譜(FT-IR)分析
            2.4.7.3 熱重分析(TG)-差示掃描量熱分析(DSC)
        2.4.8 數(shù)據(jù)處理
    2.5 結(jié)果與討論
        2.5.1 富硒大豆蛋白與非富硒大豆蛋白的組分含量比較
        2.5.2 富硒大豆蛋白脫脂效果
        2.5.3 水解度
        2.5.4 SSP靜態(tài)脫鹽
            2.5.4.1 靜態(tài)吸附時(shí)間趨勢(shì)
            2.5.4.2 解吸劑溶度的確定
            2.5.4.3 不同樹(shù)脂與樣品體積比對(duì)吸附效果和脫鹽率的影響
            2.5.4.4 樣品pH對(duì)吸附效果和脫鹽率的影響
            2.5.4.5 樣品溫度對(duì)吸附效果和脫鹽率的影響
        2.5.5 氨基酸分析
        2.5.6 相對(duì)分子質(zhì)量分布情況
        2.5.7 掃描電鏡分析
        2.5.8 FT-IR分析
        2.5.9 TG-DSC同步熱分析
    2.6 本章小結(jié)
第三章 SSP對(duì)小鼠的急性毒性評(píng)價(jià)與硒的代謝分布
    3.1 前言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.1 SSP水溶液
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 給藥與觀察
        3.3.2 指標(biāo)樣品的收集
        3.3.3 數(shù)據(jù)處理
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4.1 一般情況觀察
        3.4.2 小鼠的攝食量變化和體重變化
        3.4.3 SSP對(duì)小鼠臟器系數(shù)的影響
        3.4.4 小鼠糞便硒含量變化情況
        3.4.5 小鼠臟器的硒含量分布情況
    3.5 實(shí)驗(yàn)討論
    3.6 本章小結(jié)
第四章 SSP的體外抗氧化作用
    4.1 前言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)原料
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    4.3 試劑的配制
    4.4 實(shí)驗(yàn)方法
        4.4.1 DPPH清除率的測(cè)定
        4.4.2 水楊酸法測(cè)定羥自由基清除率
        4.4.3 FRAP法測(cè)定樣品總抗氧化能力
        4.4.4 HepG2細(xì)胞培養(yǎng)、傳代
        4.4.5 SSP對(duì)HepG2細(xì)胞的毒性實(shí)驗(yàn)
        4.4.6 SSP影響正常HepG2細(xì)胞生長(zhǎng)的活力測(cè)定
        4.4.7 HepG2細(xì)胞氧化損傷模型的建立
        4.4.8 細(xì)胞形態(tài)觀察
        4.4.9 SSP影響氧化損傷HepG2細(xì)胞活力的測(cè)定
            4.4.9.1 SSP修復(fù)HepG2細(xì)胞氧化損傷
            4.4.9.2 SSP預(yù)防HepG2細(xì)胞氧化損傷
        4.4.10 CAT活力測(cè)定
        4.4.11 數(shù)據(jù)處理
    4.5 結(jié)果與討論
        4.5.1 SSP對(duì) DPPH的清除率
        4.5.2 SSP對(duì)羥自由基的清除率
        4.5.3 SSP的亞鐵還原能力
        4.5.4 SSP對(duì)HepG2細(xì)胞增殖的影響
        4.5.5 HepG2細(xì)胞氧化損傷模型的建立
        4.5.6 SSP對(duì)氧化損傷HepG2細(xì)胞的形態(tài)的影響
        4.5.7 SSP對(duì)氧化損傷HepG2細(xì)胞存活率的影響
        4.5.8 SSP對(duì)氧化損傷HepG2細(xì)胞的CAT的影響
    4.6 本章小結(jié)
第五章 SSP對(duì)高脂飲食致大鼠肝損傷的氧化保護(hù)作用
    5.1 前言
    5.2 實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備
        5.2.1 實(shí)驗(yàn)樣品
        5.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        5.2.3 主要試劑和儀器
    5.3 實(shí)驗(yàn)方法
        5.3.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組與給藥
        5.3.2 觀察指標(biāo)與測(cè)定方法
        5.3.3 數(shù)據(jù)處理
    5.4 結(jié)果與討論
        5.4.1 體重變化
        5.4.2 肝臟抗氧化指標(biāo)
        5.4.3 肝臟炎癥因子、血脂四項(xiàng)
        5.4.4 肝臟組織病理改變
    5.5 本章小結(jié)
第六章 結(jié)論與展望
    6.1 全文總結(jié)
    6.2 研究展望
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文



本文編號(hào)：3846140