米面制品因含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)和充足的水分,是許多腐敗菌及致病菌的天然培養(yǎng)基,其中金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,以下簡稱“S.aureus”)和大腸桿菌O157(Escherichia coli O157),沙門氏菌(Salmonella)及乳桿菌(Lactobacillus)是其常見的污染菌株,目前對該類食品微生物檢測手段主要通過國家標準法,檢測程序繁瑣,耗時較長。相關(guān)研究表明這四種細菌在一定的環(huán)境條件下可進入VBNC狀態(tài),從而成功逃避國家“金標準”檢測,同時,VBNC狀態(tài)的細菌仍保留其致毒與腐敗特性,造成潛在的食品安全隱患,因此對其在食品體系中控制消減具有重要的意義。此外,目前對細菌VBNC狀態(tài)形成的條件的研究大多集中特定環(huán)境,了解米面食品微生物進入VBNC狀態(tài)的關(guān)鍵條件是消除其污染的關(guān)鍵。鑒于此,本研究的主要目的是通過建立一種快速檢測手段,實現(xiàn)對米面食品主要微生物及其VBNC狀態(tài)的檢測。同時,選取米面食品中常見的金葡菌及大腸桿菌O157為研究對象,研究外界環(huán)境條件對其VBNC狀態(tài)形成的影響,獲得其進入VBNC狀態(tài)的關(guān)鍵條件。通過獲得的關(guān)鍵條件探究改變相...

【文章頁數(shù)】：108 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 米面制品概述
        1.1.1 米面制品
        1.1.2 米面制品加工與儲藏過程中的微生物污染來源
        1.1.3 米面制品中主要微生物
    1.2 食源性微生物及其常用鑒定方法
        1.2.1 平板培養(yǎng)法
        1.2.2 免疫學(xué)的檢測
        1.2.3 核酸檢測
        1.2.4 生物傳感器檢測法
    1.3 細菌活但不可培養(yǎng)狀態(tài)(VBNC)的研究進展
        1.3.1 VBNC狀態(tài)形成的誘導(dǎo)因素
        1.3.2 VBNC狀態(tài)的生物學(xué)特性
    1.4 細菌VBNC狀態(tài)菌的檢測方法
        1.4.1 活菌直接計數(shù)法
        1.4.2 LIVE/DEAD試劑盒
        1.4.3 免疫學(xué)技術(shù)
        1.4.4 分子生物學(xué)方法
    1.5 本課題的研究背景、意義和內(nèi)容
        1.5.1 本課題的研究背景和意義
        1.5.2 研究內(nèi)容
第二章 米面制品主要微生物PSR快速檢測體系建立與優(yōu)化
    2.1 前言
    2.2 材料與設(shè)備
        2.2.1 實驗菌株
        2.2.2 實驗試劑及材料
        2.2.3 實驗儀器
    2.3 實驗方法
        2.3.1 PSR反應(yīng)引物設(shè)計與合成
        2.3.2 菌株DNA的提取
        2.3.3 PSR等溫擴增反應(yīng)體系的建立
        2.3.4 PSR等溫擴增體系的優(yōu)化
        2.3.5 優(yōu)化的PSR檢測方法的特異性與靈敏度分析
        2.3.6 PSR技術(shù)檢測金葡菌、沙門氏菌及乳桿菌
        2.3.7 人工模擬污染食品樣本檢測
    2.4 結(jié)果與討論
        2.4.1 鈣黃綠素與Mn²⁺濃度比對PSR擴增顯色結(jié)果的影響
        2.4.2 甜菜堿濃度對PSR擴增體系的影響
        2.4.3 反應(yīng)時間對PSR擴增體系的影響
        2.4.4 PSR擴增反應(yīng)檢測大腸桿菌的特異性與靈敏度的檢測
        2.4.5 PSR技術(shù)檢測金葡菌、沙門氏菌、乳桿菌特異性評價
        2.4.6 PSR技術(shù)檢測金葡菌、沙門氏菌、乳桿菌的靈敏度分析
        2.4.7 PSR技術(shù)檢測人工模擬污染食品靈敏度分析
    2.5 小結(jié)
第三章 米面食品微生物VBNC狀態(tài)的檢測
    3.1 前言
    3.2 材料與設(shè)備
        3.2.1 實驗菌株
        3.2.2 實驗試劑及材料
        3.2.3 實驗儀器及設(shè)備
    3.3 .實驗方法
        3.3.1 金葡菌及大腸桿菌O157 生長曲線的測定
        3.3.2 金葡菌及大腸桿菌O157 VBNC狀態(tài)的誘導(dǎo)
        3.3.3 儲藏過程金葡菌及大腸桿菌O157 可培養(yǎng)數(shù)的測定
        3.3.4 熒光顯微鏡的觀察
        3.3.5 PMA-PSR檢測VBNC狀態(tài)的菌株
        3.3.6 PMA-PSR檢測食品體系中的VBNC狀態(tài)菌
    3.4 實驗結(jié)果與討論
        3.4.1 金葡菌及大腸桿菌O157 生長曲線的測定
        3.4.2 儲藏過程中金葡菌及大腸桿菌O157 可培養(yǎng)數(shù)的變化
        3.4.3 細菌VBNC狀態(tài)的確定
        3.4.4 不同狀態(tài)的金葡菌及大腸桿菌O157的PMA-PSR檢測結(jié)果
        3.4.5 PMA-PSR恒溫擴增反應(yīng)靈敏度評價
        3.4.6 PMA-PSR檢測食品體系中VBNC狀態(tài)菌
    3.5 小結(jié)
第四章 環(huán)境條件對米面制品微生物VBNC狀態(tài)形成的影響
    4.1 引言
    4.2 材料與設(shè)備
        4.2.1 實驗菌株
        4.2.2 實驗試劑及材料
        4.2.3 實驗儀器及設(shè)備
    4.3 實驗方法
        4.3.1 金葡菌誘導(dǎo)方法
        4.3.2 大腸桿菌O157 誘導(dǎo)方法
        4.3.3 誘導(dǎo)儲存過程中可培養(yǎng)數(shù)的測定
        4.3.4 熒光顯微鏡觀察
        4.3.5 原子力顯微鏡(AFM)測定VBNC狀態(tài)細菌的形貌
    4.4 實驗結(jié)果與討論
        4.4.1 儲藏過程中金葡菌可培養(yǎng)數(shù)的變化
        4.4.2 儲藏過程中大腸桿菌O157 的可培養(yǎng)數(shù)的變化
        4.4.3 儲藏后細菌活性的變化
        4.4.4 原子力顯微鏡測定VBNC狀態(tài)菌體表面形貌
    4.5 小結(jié)
第五章 米面制品微生物VBNC狀態(tài)的控制與消減
    5.1 引言
    5.2 材料與設(shè)備
        5.2.1 實驗菌株
        5.2.2 實驗試劑與材料
        5.2.3 實驗儀器及設(shè)備
    5.3 實驗方法
        5.3.1 酸度對VBNC狀態(tài)形成的抑制效果
        5.3.2 營養(yǎng)狀態(tài)對VBNC狀態(tài)形成的抑制效果
        5.3.3 細菌的可培養(yǎng)計數(shù)
        5.3.4 熒光顯微鏡觀察
        5.3.5 米面食品體系中VBNC狀態(tài)的消除
    5.4 實驗結(jié)論與討論
        5.4.1 酸度對VBNC狀態(tài)的抑制
        5.4.2 營養(yǎng)狀態(tài)對VBNC狀態(tài)的抑制
        5.4.3 米面食品體系中VBNC狀態(tài)的消除
    5.5 小結(jié)
結(jié)論與展望
    一、結(jié)論
    二、主要創(chuàng)新點
    三、展望
參考文獻
攻讀碩士期間所取得的學(xué)術(shù)成果
致謝
附件



本文編號：3844675