冷鏈貯運(yùn)的發(fā)展使得原料乳中絕大部分外源微生物的生長(zhǎng)得到了有效的抑制,在低溫條件下嗜冷菌能夠繼續(xù)生長(zhǎng)繁殖逐漸成為原料乳中的優(yōu)勢(shì)微生物。以假單胞菌為代表的部分嗜冷菌能夠分泌一些耐熱的蛋白酶和脂肪酶,在原料乳常規(guī)的加熱滅菌處理后依然能夠保持部分活性,殘存的酶會(huì)對(duì)乳中的蛋白質(zhì)和脂肪等營(yíng)養(yǎng)成分進(jìn)行分解,導(dǎo)致乳制品的品質(zhì)降低。本論文從黑龍江地區(qū)的原料乳中篩選出一株高產(chǎn)胞外蛋白酶和胞外脂肪酶的嗜冷菌,并對(duì)其分泌的蛋白酶和脂肪酶的耐熱性進(jìn)行研究。利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)對(duì)該菌株的胞外蛋白質(zhì)類物質(zhì)進(jìn)行鑒定和生物信息學(xué)分析。從黑龍江地區(qū)采集的原料乳運(yùn)用平板畫線法分理出20株嗜冷菌,將分離出的20株嗜冷菌分別利用羅丹明B平板法和脫脂乳平板法鑒定其產(chǎn)脂肪酶和蛋白酶的能力,最終篩選出一株產(chǎn)蛋白酶和脂肪酶能力最強(qiáng)的菌株,經(jīng)16S rDNA鑒定該菌株為熒光假單胞菌,命名為熒光假單胞菌W3。熒光假單胞菌W3分泌的胞外蛋白酶和胞外脂肪酶具有耐熱性,經(jīng)過(guò)65℃水浴30 min后,脂肪酶的殘余率為45.69%、蛋白酶的殘余率為47.76%;90℃水浴5 min后,脂肪酶的殘余率為26.32%、蛋白酶的殘余率為35.91%;137...

【文章頁(yè)數(shù)】：75 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 課題的研究背景與目的意義
    1.2 原料乳中的外源微生物多樣性
    1.3 原料乳中嗜冷菌概述
        1.3.1 嗜冷菌的定義及來(lái)源
        1.3.2 原料乳中的優(yōu)勢(shì)嗜冷菌
    1.4 原料乳中嗜冷假單胞菌的潛在危害
        1.4.1 菌體數(shù)目超標(biāo)造成的危害
        1.4.2 菌體代謝產(chǎn)物的危害
        1.4.3 潛在致病性
    1.5 嗜冷菌蛋白酶的研究進(jìn)展
    1.6 嗜冷菌脂肪酶的研究進(jìn)展
    1.7 蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)在微生物領(lǐng)域的應(yīng)用
        1.7.1 蛋白質(zhì)組學(xué)指導(dǎo)菌株生物合成
        1.7.2 蛋白質(zhì)組學(xué)指導(dǎo)菌株耐受性改造
    1.8 主要研究?jī)?nèi)容
    1.9 技術(shù)路線
第2章 材料和方法
    2.1 材料及儀器
        2.1.1 材料與試劑
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 原料乳中優(yōu)勢(shì)嗜冷菌產(chǎn)耐熱蛋白酶/脂肪酶的研究
        2.2.1 原料乳中嗜冷菌的分離純化
        2.2.2 羅丹明B平板法鑒定熒光假單胞的產(chǎn)脂肪酶能力
        2.2.3 脫脂乳平板法鑒定熒光假單胞的產(chǎn)蛋白酶能力
        2.2.4 優(yōu)勢(shì)嗜冷菌的16S rDNA鑒定
        2.2.5 高產(chǎn)蛋白酶/脂肪酶嗜冷菌生長(zhǎng)能力測(cè)定
        2.2.6 蛋白酶活力測(cè)定
        2.2.7 脂肪酶活力測(cè)定
        2.2.8 菌株耐熱性測(cè)定
        2.2.9 游離氨基酸含量測(cè)定
    2.3 熒光假單胞菌W3培養(yǎng)液的蛋白質(zhì)組學(xué)分析
        2.3.1 蛋白質(zhì)提取
        2.3.2 蛋白質(zhì)提取質(zhì)控
        2.3.3 蛋白酶解
        2.3.4 肽段標(biāo)記
        2.3.5 肽段分離
        2.3.6 高效液相色譜分析
        2.3.7 質(zhì)譜檢測(cè)
    2.4 生物信息學(xué)分析
        2.4.1 蛋白聚類分析
        2.4.2 蛋白質(zhì)GO功能注釋分析
        2.4.3 Pathway富集分析
    2.5 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析
第3章 優(yōu)勢(shì)嗜冷菌的篩選及其產(chǎn)酶特性研究
    3.1 原料乳中高產(chǎn)蛋白酶/脂肪酶嗜冷菌的篩選
    3.2 3號(hào)菌株的16S rDNA測(cè)定
    3.3 熒光假單胞菌W3生長(zhǎng)能力測(cè)定
    3.4 熒光假單胞菌W3分泌胞外酶能力測(cè)定
    3.5 熒光假單胞菌W3菌數(shù)與酶活隨時(shí)間變化研究
    3.6 熒光假單胞菌W3菌株耐熱能力測(cè)定
    3.7 熒光假單胞菌W3分泌胞外蛋白酶和脂肪酶耐熱性研究
    3.8 UHT條件滅菌后菌液的酶活力變化研究
    3.9 本章小結(jié)
第4章熒光假單胞菌W3分泌胞外蛋白質(zhì)組學(xué)分析
    4.1 蛋白質(zhì)組學(xué)取樣點(diǎn)的選擇
    4.2 樣品蛋白的提取
    4.3 蛋白定量重復(fù)性分析
    4.4 蛋白質(zhì)鑒定結(jié)果分析
        4.4.1 鑒定出蛋白質(zhì)和多肽大小分析
        4.4.2 鑒定出蛋白質(zhì)特異性肽段分析
    4.5 蛋白質(zhì)iTRAQ分析
    4.6 W3菌株分泌乳制品潛在危害蛋白
        4.6.1 W3菌株分泌的胞外蛋白酶
        4.6.2 W3菌株分泌的胞外脂肪酶
        4.6.3 W3菌株分泌的肽酶
        4.6.4 W3菌株分泌的溶菌酶
    4.7 差異蛋白的表達(dá)聚類分析
    4.8 差異蛋白的GO功能注釋分析
        4.8.1 全差異蛋白的GO富集分析
        4.8.2 原料乳潛在危害蛋白的GO分析
    4.9 差異蛋白的Pathway富集分析
    4.10 差異蛋白COG注釋分析
    4.11 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文及其它成果
致謝



本文編號(hào)：3842992