發(fā)布時(shí)間：2023-04-23 04:32

　　隨著海洋科學(xué)的發(fā)展,海洋中的藻類及其衍生物海藻多糖因?yàn)榫哂休^強(qiáng)的生物活性、開(kāi)發(fā)價(jià)值和應(yīng)用前景被科學(xué)界日益關(guān)注。但由于其易凝特點(diǎn),在應(yīng)用上受到限制,而其降解產(chǎn)物海藻寡糖分子量較小,易于被動(dòng)植物利用,彌補(bǔ)了海藻多糖在應(yīng)用上缺陷,因海藻寡糖多數(shù)靠海藻酸裂解酶降解海藻多糖而得到,因此本文主要研究酶解法制備海藻寡糖工藝優(yōu)化,酶解液中海藻寡糖的提取,酶解液中海藻寡糖的定性、定量檢測(cè),酶解液中植物激素的定性定量檢測(cè)。(1)海藻酸裂解酶粗酶液的制備及酶解條件的優(yōu)化海藻酸裂解酶酶活檢測(cè):分別選取海藻裂解75%、100%、100%放置1 d、100%放置2 d、100%放置3 d提取粗酶液按10%的量加入到海帶富集培養(yǎng)基中培養(yǎng)4 d,每天檢測(cè)酶活并觀察海帶裂解情況,結(jié)果顯示當(dāng)海藻裂解75%時(shí)酶活較高且能使海帶完全液化。因此通過(guò)以上實(shí)驗(yàn)可以確定海藻酸裂解酶應(yīng)在海藻分解75%時(shí)提取且此時(shí)活性較好。酶解條件優(yōu)化:實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)海藻酸裂解酶在不同的海帶裂解培養(yǎng)基、震蕩時(shí)間及海帶濃度等4個(gè)方向上綜合分析得到海藻酸裂解酶在有無(wú)機(jī)鹽離子例如:硫酸銨、氯化鈉等的培養(yǎng)基中海藻酸裂解酶活性相對(duì)較高且海藻寡糖的產(chǎn)量也是最高。酶解反...

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
1 引言
    1.1 海藻寡糖
        1.1.1 海藻寡糖
        1.1.2 海藻寡糖的應(yīng)用
        1.1.3 海藻寡糖制備方法
    1.2 海藻酸裂解酶
    1.3 海藻寡糖的檢測(cè)方法
        1.3.1 高效液相色譜法(HPLC)
        1.3.2 硫酸-苯酚法
        1.3.3 紫外分光檢測(cè)法
    1.4 植物激素檢測(cè)
        1.4.1 生長(zhǎng)素:吲哚乙酸(IAA)
        1.4.2 細(xì)胞分裂素:玉米素(Zeatin)、反式玉米核素(TZR)、異戊烯基腺苷(iP)、異戊烯基腺嘌呤(IPA)
        1.4.3 脫落酸(ABA)
    1.5 研究目的及意義
2 酶解法制備海藻寡糖工藝優(yōu)化
    2.1 材料與方法
        2.1.1 材料
            2.1.1.1 樣品
            2.1.1.2 實(shí)驗(yàn)菌種
        2.1.2 培養(yǎng)基
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1.3.1 海藻酸鈉裂解酶粗酶液的提取方法
            2.1.3.2 海藻酸鈉裂解酶酶活及海藻寡糖的含量的檢測(cè)方法
            2.1.3.3 不同發(fā)酵產(chǎn)酶時(shí)間對(duì)酶解反應(yīng)的影響
            2.1.3.4 酶解液不同成分對(duì)酶解反應(yīng)的影響
            2.1.3.5 不同溫度與搖動(dòng)時(shí)間對(duì)酶解反應(yīng)的影響
            2.1.3.6 不同海帶濃度對(duì)酶解反應(yīng)的影響
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 檢測(cè)S1菌種在富集培養(yǎng)基中的活性
        2.2.2 酶解反應(yīng)體系的最佳成分
        2.2.3 酶解反應(yīng)的最適溫度與搖動(dòng)時(shí)間
        2.2.4 酶解反應(yīng)的最佳海帶濃度
    2.3 討論
        2.3.1 發(fā)酵工藝優(yōu)化分析
        2.3.2 小結(jié)
3 海帶酶解產(chǎn)物中海藻寡糖的分離與提取
    3.1 紫外吸收法
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料和試劑
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 去除蛋白質(zhì)
            3.3.1.1 重金屬鹽使蛋白質(zhì)變性析出
            3.3.1.2 乙醇使蛋白質(zhì)變性析出
        3.3.2 透膜分離蛋白質(zhì)
        3.3.3 去除無(wú)機(jī)離子
        3.3.4 多糖與寡糖的分離
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4.1 考馬斯亮藍(lán)和乙醇驗(yàn)證蛋白質(zhì)析出
        3.4.2 重金屬鹽使蛋白質(zhì)變性析出
        3.4.3 透膜分離蛋白質(zhì)
    3.5 小結(jié)
4 海帶酶解液中海藻寡糖含量檢測(cè)方法的建立
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 標(biāo)準(zhǔn)樣品篩選
            4.2.1.1 制備標(biāo)準(zhǔn)樣品
            4.2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)品的選擇
        4.2.2 確定酶解液中海藻寡糖含量檢測(cè)體系
        4.2.3 溫度對(duì)海藻寡糖檢測(cè)結(jié)果的影響
        4.2.4 沸水浴不同時(shí)間對(duì)海帶酶解液中寡糖含量的影響
        4.2.5 冰水浴水解不同時(shí)間對(duì)海帶酶解液中海藻寡糖含量的影響
        4.2.6 確定海帶酶解液中海藻寡糖檢測(cè)的方法
        4.2.7 標(biāo)準(zhǔn)曲線的選擇
            4.2.7.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的確定
            4.2.7.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的計(jì)算
        4.2.8 薄層層析(TLC)法測(cè)定海帶酶解液中多糖
            4.2.8.1 展開(kāi)劑和顯色劑
            4.2.8.2 海帶酶解液濃縮倍數(shù)的選擇
            4.2.8.3 海帶酶解液pH值的選擇
    4.3 結(jié)果與討論
        4.3.1 確定海藻寡糖含量檢測(cè)的方法
            4.3.1.1 標(biāo)準(zhǔn)樣品的確定
            4.3.1.2 海藻寡糖檢測(cè)體系的確定
            4.3.1.3 溫度和時(shí)間對(duì)海藻寡糖水解的影響
        4.3.2 確定標(biāo)準(zhǔn)曲線
        4.3.3 薄層層析(TLC)法測(cè)定海帶酶解液中寡糖成分
            4.3.3.1 海帶酶解液濃縮倍數(shù)的選擇
            4.3.3.2 海帶發(fā)酵液pH值的選擇
        4.3.4 討論
5 海帶酶解液中植物激素檢測(cè)
    5.1 樣品及指標(biāo)信息
        5.1.1 樣品
        5.1.2 指標(biāo)
    5.2 試劑、標(biāo)準(zhǔn)品與儀器
        5.2.1 試劑與標(biāo)準(zhǔn)品
            5.2.1.1 試劑
            5.2.1.2 流動(dòng)相配置
    5.3 實(shí)驗(yàn)方法
    5.4 HPLC-MS/MS
        5.4.1 液相條件
        5.4.2 質(zhì)譜參數(shù)
    5.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.5.1 生長(zhǎng)素:吲哚乙酸(IAA)
        5.5.2 細(xì)胞分裂素(CTK)—玉米素(Zeatin)、反式玉米核素(TZR)、異戊烯基腺苷(iP)、異戊烯基腺嘌呤(iPA)
            5.5.2.1 玉米素(Zeatin)
            5.5.2.2 反式玉米核素(TZR)
            5.5.2.3 異戊烯基腺嘌呤(iP)
            5.5.2.4 異戊烯基腺苷(iPA)
        5.5.3 脫落酸(ABA)
    5.6 六種激素檢測(cè)結(jié)果
結(jié)論
展望
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝



本文編號(hào)：3799096