隨著海洋科學的發(fā)展,海洋中的藻類及其衍生物海藻多糖因為具有較強的生物活性、開發(fā)價值和應用前景被科學界日益關(guān)注。但由于其易凝特點,在應用上受到限制,而其降解產(chǎn)物海藻寡糖分子量較小,易于被動植物利用,彌補了海藻多糖在應用上缺陷,因海藻寡糖多數(shù)靠海藻酸裂解酶降解海藻多糖而得到,因此本文主要研究酶解法制備海藻寡糖工藝優(yōu)化,酶解液中海藻寡糖的提取,酶解液中海藻寡糖的定性、定量檢測,酶解液中植物激素的定性定量檢測。(1)海藻酸裂解酶粗酶液的制備及酶解條件的優(yōu)化海藻酸裂解酶酶活檢測:分別選取海藻裂解75%、100%、100%放置1 d、100%放置2 d、100%放置3 d提取粗酶液按10%的量加入到海帶富集培養(yǎng)基中培養(yǎng)4 d,每天檢測酶活并觀察海帶裂解情況,結(jié)果顯示當海藻裂解75%時酶活較高且能使海帶完全液化。因此通過以上實驗可以確定海藻酸裂解酶應在海藻分解75%時提取且此時活性較好。酶解條件優(yōu)化:實驗通過對海藻酸裂解酶在不同的海帶裂解培養(yǎng)基、震蕩時間及海帶濃度等4個方向上綜合分析得到海藻酸裂解酶在有無機鹽離子例如:硫酸銨、氯化鈉等的培養(yǎng)基中海藻酸裂解酶活性相對較高且海藻寡糖的產(chǎn)量也是最高。酶解反...

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
1 引言
    1.1 海藻寡糖
        1.1.1 海藻寡糖
        1.1.2 海藻寡糖的應用
        1.1.3 海藻寡糖制備方法
    1.2 海藻酸裂解酶
    1.3 海藻寡糖的檢測方法
        1.3.1 高效液相色譜法(HPLC)
        1.3.2 硫酸-苯酚法
        1.3.3 紫外分光檢測法
    1.4 植物激素檢測
        1.4.1 生長素:吲哚乙酸(IAA)
        1.4.2 細胞分裂素:玉米素(Zeatin)、反式玉米核素(TZR)、異戊烯基腺苷(iP)、異戊烯基腺嘌呤(IPA)
        1.4.3 脫落酸(ABA)
    1.5 研究目的及意義
2 酶解法制備海藻寡糖工藝優(yōu)化
    2.1 材料與方法
        2.1.1 材料
            2.1.1.1 樣品
            2.1.1.2 實驗菌種
        2.1.2 培養(yǎng)基
        2.1.3 實驗方法
            2.1.3.1 海藻酸鈉裂解酶粗酶液的提取方法
            2.1.3.2 海藻酸鈉裂解酶酶活及海藻寡糖的含量的檢測方法
            2.1.3.3 不同發(fā)酵產(chǎn)酶時間對酶解反應的影響
            2.1.3.4 酶解液不同成分對酶解反應的影響
            2.1.3.5 不同溫度與搖動時間對酶解反應的影響
            2.1.3.6 不同海帶濃度對酶解反應的影響
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 檢測S1菌種在富集培養(yǎng)基中的活性
        2.2.2 酶解反應體系的最佳成分
        2.2.3 酶解反應的最適溫度與搖動時間
        2.2.4 酶解反應的最佳海帶濃度
    2.3 討論
        2.3.1 發(fā)酵工藝優(yōu)化分析
        2.3.2 小結(jié)
3 海帶酶解產(chǎn)物中海藻寡糖的分離與提取
    3.1 紫外吸收法
    3.2 實驗材料和試劑
    3.3 實驗方法
        3.3.1 去除蛋白質(zhì)
            3.3.1.1 重金屬鹽使蛋白質(zhì)變性析出
            3.3.1.2 乙醇使蛋白質(zhì)變性析出
        3.3.2 透膜分離蛋白質(zhì)
        3.3.3 去除無機離子
        3.3.4 多糖與寡糖的分離
    3.4 實驗結(jié)果
        3.4.1 考馬斯亮藍和乙醇驗證蛋白質(zhì)析出
        3.4.2 重金屬鹽使蛋白質(zhì)變性析出
        3.4.3 透膜分離蛋白質(zhì)
    3.5 小結(jié)
4 海帶酶解液中海藻寡糖含量檢測方法的建立
    4.1 實驗材料
    4.2 實驗方法
        4.2.1 標準樣品篩選
            4.2.1.1 制備標準樣品
            4.2.1.2 標準品的選擇
        4.2.2 確定酶解液中海藻寡糖含量檢測體系
        4.2.3 溫度對海藻寡糖檢測結(jié)果的影響
        4.2.4 沸水浴不同時間對海帶酶解液中寡糖含量的影響
        4.2.5 冰水浴水解不同時間對海帶酶解液中海藻寡糖含量的影響
        4.2.6 確定海帶酶解液中海藻寡糖檢測的方法
        4.2.7 標準曲線的選擇
            4.2.7.1 標準曲線的確定
            4.2.7.2 實驗結(jié)果的計算
        4.2.8 薄層層析(TLC)法測定海帶酶解液中多糖
            4.2.8.1 展開劑和顯色劑
            4.2.8.2 海帶酶解液濃縮倍數(shù)的選擇
            4.2.8.3 海帶酶解液pH值的選擇
    4.3 結(jié)果與討論
        4.3.1 確定海藻寡糖含量檢測的方法
            4.3.1.1 標準樣品的確定
            4.3.1.2 海藻寡糖檢測體系的確定
            4.3.1.3 溫度和時間對海藻寡糖水解的影響
        4.3.2 確定標準曲線
        4.3.3 薄層層析(TLC)法測定海帶酶解液中寡糖成分
            4.3.3.1 海帶酶解液濃縮倍數(shù)的選擇
            4.3.3.2 海帶發(fā)酵液pH值的選擇
        4.3.4 討論
5 海帶酶解液中植物激素檢測
    5.1 樣品及指標信息
        5.1.1 樣品
        5.1.2 指標
    5.2 試劑、標準品與儀器
        5.2.1 試劑與標準品
            5.2.1.1 試劑
            5.2.1.2 流動相配置
    5.3 實驗方法
    5.4 HPLC-MS/MS
        5.4.1 液相條件
        5.4.2 質(zhì)譜參數(shù)
    5.5 實驗結(jié)果
        5.5.1 生長素:吲哚乙酸(IAA)
        5.5.2 細胞分裂素(CTK)—玉米素(Zeatin)、反式玉米核素(TZR)、異戊烯基腺苷(iP)、異戊烯基腺嘌呤(iPA)
            5.5.2.1 玉米素(Zeatin)
            5.5.2.2 反式玉米核素(TZR)
            5.5.2.3 異戊烯基腺嘌呤(iP)
            5.5.2.4 異戊烯基腺苷(iPA)
        5.5.3 脫落酸(ABA)
    5.6 六種激素檢測結(jié)果
結(jié)論
展望
參考文獻
攻讀學位期間發(fā)表的學術(shù)論文
致謝



本文編號：3799096