近年來(lái),食源性疾病的發(fā)病率居高不下,在全世界范圍內(nèi)都是一個(gè)日益嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題。世界衛(wèi)生組織(World Health Organization,WHO)統(tǒng)計(jì)顯示由病原微生物引起的食源性疾病比例達(dá)50%以上,因此急需建立一種有效的食源性致病菌檢測(cè)方法。傳統(tǒng)的食源性病原體檢測(cè)和鑒定方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力,不足以滿足食品快速檢測(cè)的要求。為阻止疾病的傳播、監(jiān)控食品的衛(wèi)生安全,保障人民的安全,急需建立一種快速、簡(jiǎn)單和有效的檢測(cè)技術(shù)。本文將腸粘附性大腸桿菌、腸產(chǎn)毒性大腸桿菌、腸致病性大腸桿菌、腸侵襲性大腸桿菌、腸出血性大腸桿菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌、假結(jié)核耶爾森菌、結(jié)腸彎曲菌、空腸彎曲菌、副溶血性弧菌、霍亂弧菌、腸炎沙門氏菌、類志賀鄰單胞菌、嗜水氣單胞菌和福氏志賀氏菌為模式菌株,建立一種快速檢測(cè)15種食源性致病菌的多重實(shí)時(shí)PCR技術(shù)。主要研究結(jié)果如下:(1)通過(guò)HAND系統(tǒng)建立了一種能夠同時(shí)檢測(cè)15種食源性致病菌多重實(shí)時(shí)PCR方法,具有特異性高、靈敏度好、重復(fù)性和穩(wěn)定性高等特點(diǎn),并且適用于復(fù)雜樣本的檢測(cè);(2)通過(guò)玻璃化技術(shù),將多重實(shí)時(shí)PCR中熱不穩(wěn)定成分(Taq酶、dNTP、染料和引物)玻璃化到PCR管...

【文章頁(yè)數(shù)】：80 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
第1章 緒論
    1.1 食源性致病菌
    1.2 病原微生物常用鑒別方法
        1.2.1 傳統(tǒng)培養(yǎng)法
        1.2.2 傳統(tǒng)培養(yǎng)法的優(yōu)化
        1.2.3 免疫學(xué)檢測(cè)
        1.2.4 核酸檢測(cè)
    1.3 研究目的及意義
    1.4 技術(shù)路線
第2章 基于HAND系統(tǒng)食源性致病菌實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)技術(shù)的建立
    2.1 材料與設(shè)備
        2.1.1 菌株及來(lái)源
        2.1.2 培養(yǎng)基和試劑
        2.1.3 主要儀器
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 菌株的培養(yǎng)和模板DNA的制備
        2.2.2 靶序列與引物
        2.2.3 單重?zé)晒舛縋CR體系的建立
        2.2.4 單重實(shí)時(shí)PCR的特異性
        2.2.5 單重實(shí)時(shí)PCR的敏感性
        2.2.6 單重實(shí)時(shí)PCR的重復(fù)性和穩(wěn)定性
        2.2.7 多重實(shí)時(shí)PCR體系的建立
        2.2.8 多重時(shí)候PCR的特異性
        2.2.9 多重實(shí)時(shí)PCR的敏感性
        2.2.10 多重實(shí)時(shí)PCR的重復(fù)性和穩(wěn)定性
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 單重?zé)晒舛縋CR體系的建立
        2.3.2 單重?zé)晒舛縋CR特異性結(jié)果
        2.3.3 單重實(shí)時(shí)PCR敏感性結(jié)果
        2.3.4 單重實(shí)時(shí)PCR重復(fù)性和穩(wěn)定性結(jié)果
        2.3.5 多重實(shí)時(shí)PCR體系的建立
        2.3.6 多重?zé)晒舛縋CR特異性結(jié)果
        2.3.7 多重?zé)晒舛縋CR敏感性結(jié)果
        2.3.8 多重?zé)晒舛縋CR重復(fù)性和穩(wěn)定性結(jié)果
    2.4 本章小結(jié)
第3章 多重實(shí)時(shí)PCR體系的玻璃化
    3.1 材料與設(shè)備
        3.1.1 菌株及來(lái)源
        3.1.2 培養(yǎng)基和試劑
        3.1.3 主要儀器
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 菌株的培養(yǎng)和模板DNA的制備
        3.2.2 反應(yīng)體系的玻璃化
        3.2.3 玻璃化試劑穩(wěn)定性
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 反應(yīng)體系的玻璃化
        3.3.2 玻璃化試劑穩(wěn)定性
    3.4 本章小結(jié)
第4章 復(fù)雜樣本的快速提取
    4.1 材料與方法
        4.1.1 菌株及來(lái)源
        4.1.2 培養(yǎng)基與試劑
        4.1.3 主要儀器
    4.2 復(fù)雜樣本快速提取方法
        4.2.1 食品模擬樣本
        4.2.2 糞便模擬標(biāo)本
    4.3 結(jié)果
    4.4 本章小結(jié)
結(jié)論
展望
創(chuàng)新點(diǎn)
致謝
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文和科研成果



本文編號(hào)：3792530