發(fā)布時(shí)間：2023-03-02 20:10

　　羅非魚加工過程中會產(chǎn)生大量的魚皮,其含有大量的蛋白質(zhì),具有較高的利用價(jià)值。本文以羅非魚新鮮魚皮為原料提取膠原,采用酸熱處理降解生成明膠化膠原,并開展了明膠化過程的系統(tǒng)研究;為解決含魚明膠體系中膠原蛋白肽含量測定的諸多問題,對雙縮脲法測定羅非魚源膠原蛋白肽含量的方法進(jìn)行了改良及應(yīng)用評價(jià);對一種來自于枯草芽孢桿菌的堿性膠原蛋白酶進(jìn)行了分離純化、酶學(xué)性質(zhì)及結(jié)構(gòu)模擬研究,并采用磺化聚苯乙烯(sulfonated polystyrene,SPS)納米粒子固載膠原蛋白酶;以固定化酶水解羅非魚皮明膠化膠原制備膠原蛋白肽為研究體系,基于蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)知識和3-D模型解析了多組分復(fù)雜體系的動(dòng)態(tài)降解行為;以酶解得到的膠原蛋白肽為原料制備了肽鈣螯合物,優(yōu)化了螯合工藝,研究了螯合物的穩(wěn)定性,并采用Caco-2細(xì)胞模型評價(jià)了螯合物體外促鈣吸收作用。具體研究結(jié)果如下:(1)以羅非魚新鮮魚皮和魚鱗為原料,通過纖維組織觀察發(fā)現(xiàn)羅非魚皮中主要為Ⅰ型膠原;采用單純醋酸提取及胃蛋白酶輔助醋酸提取兩種方法制得了魚皮、魚鱗酸溶性膠原(ASC)及酶促酸溶性膠原(PSC),對產(chǎn)物進(jìn)行了系統(tǒng)表征及性質(zhì)對比分析。結(jié)果表明:魚皮ASC和PS...

【文章頁數(shù)】：186 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 羅非魚養(yǎng)殖及加工現(xiàn)狀
        1.1.1 羅非魚習(xí)性及養(yǎng)殖現(xiàn)狀
        1.1.2 羅非魚加工現(xiàn)狀
        1.1.3 羅非魚的下腳料的綜合利用
        1.1.4 羅非魚產(chǎn)業(yè)存在的問題及產(chǎn)業(yè)轉(zhuǎn)型的迫切性
    1.2 膠原蛋白的研究進(jìn)展
        1.2.1 膠原蛋白的分類
        1.2.2 膠原蛋白的結(jié)構(gòu)
        1.2.3 膠原蛋白的提取方法
        1.2.4 膠原蛋白的應(yīng)用
    1.3 膠原明膠化過程
        1.3.1 明膠概述
        1.3.2 明膠結(jié)構(gòu)
        1.3.3 明膠的提取方法
    1.4 膠原明膠化過程的微觀結(jié)構(gòu)變化研究
    1.5 魚明膠及酶解制備膠原蛋白肽
        1.5.1 魚明膠概況
        1.5.2 魚明膠的氨基酸組成
        1.5.3 魚明膠的應(yīng)用
        1.5.4 膠原蛋白肽的概述
    1.6 膠原蛋白酶性質(zhì)及酶的分離純化方法
        1.6.1 膠原蛋白酶性質(zhì)
        1.6.2 酶的純化方法
    1.7 膠原蛋白肽含量的檢測方法
    1.8 3-D模型構(gòu)建在蛋白質(zhì)酶促水解過程的應(yīng)用研究
    1.9 肽螯合鈣的研究進(jìn)展
        1.9.1 螯合機(jī)制
        1.9.2 肽鈣螯合物的吸收利用
        1.9.3 生產(chǎn)制備工藝
        1.9.4 肽鈣螯合物的特性及促鈣吸收的機(jī)理
        1.9.5 肽鈣螯合物的結(jié)合性能分析
        1.9.6 肽鈣螯合產(chǎn)品研究
    1.10 本文的研究目的、研究內(nèi)容
        1.10.1 研究目的及意義
        1.10.2 研究內(nèi)容
        1.10.3 研究技術(shù)路線
第二章 羅非魚皮膠原纖維結(jié)構(gòu)及性質(zhì)研究
    2.1 引言
    2.2 材料與儀器
        2.2.1 主要材料和試劑
        2.2.2 主要儀器與設(shè)備
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 羅非魚新鮮魚皮和魚鱗基本成分的測定
        2.3.2 魚皮膠原纖維的分布
        2.3.3 羅非魚魚皮、魚鱗酸溶性膠原(ASC)和酶促酸溶性膠原(PSC)提取方法
        2.3.4 膠原產(chǎn)物性質(zhì)的測定
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 羅非魚魚皮和魚鱗組成成分的比較
        2.4.2 羅非魚皮中膠原纖維的分布
        2.4.3 膠原產(chǎn)物純度的測定結(jié)果
        2.4.4 紫外光譜分析
        2.4.5 氨基酸組成分析
        2.4.6 FTIR分析
        2.4.7 膠原熱收縮溫度測定(Ts)
        2.4.8 膠原產(chǎn)物分子量分布測定結(jié)果
    2.5 本章小節(jié)
第三章 羅非魚皮膠原明膠化過程的研究
    3.1 引言
    3.2 材料與儀器
        3.2.1 主要材料和試劑
        3.2.2 主要儀器與設(shè)備
    3.3 實(shí)驗(yàn)流程及方法
        3.3.1 鹽酸法提取羅非魚魚皮明膠化膠原的制備方法
        3.3.2 羅非魚魚皮明膠的提取及其提取率計(jì)算
        3.3.3 羅非魚魚皮膠原基本成分的測定方法
        3.3.4 明膠化膠原的熱穩(wěn)定性分析
        3.3.5 紅外光譜分析
        3.3.6 明膠化膠原的圓二色譜分析
        3.3.7 產(chǎn)物亞基組成及分子量分布
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 羅非魚魚皮膠原基本成分測定結(jié)果
        3.4.2 酸處理時(shí)間對明膠提取率的影響
        3.4.3 不同酸處理時(shí)間下膠原降解物的紅外光譜分析
        3.4.4 酸處理對羅非魚皮膠原降解物熱穩(wěn)定性的影響
        3.4.5 酸處理羅非魚皮膠原圓二色譜結(jié)果分析
        3.4.6 不同酸處理時(shí)間下羅非魚皮膠原降解物的SDS-PAGE電泳分析
    3.5 本章小結(jié)
第四章 雙縮脲法測定羅非魚源膠原蛋白肽含量的改良及應(yīng)用評價(jià)
    4.1 引言
    4.2 材料與儀器
        4.2.1 材料與試劑
        4.2.2 儀器與設(shè)備
    4.3 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和方法
        4.3.1 實(shí)驗(yàn)流程
        4.3.2 測定方法最適參數(shù)的選定
        4.3.3 最適條件下標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作
        4.3.4 精密度實(shí)驗(yàn)
        4.3.5 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)
        4.3.6 魚皮膠原蛋白肽的加樣回收率試驗(yàn)
        4.3.7 魚皮膠原蛋白肽與羅非魚皮膠原蛋白的加樣回收率試驗(yàn)
        4.3.8 不同種類的羅非魚膠原蛋白肽加樣回收率試驗(yàn)
        4.3.9 不同種類羅非魚膠原蛋白肽與羅非魚皮膠原蛋白的加樣回收率試驗(yàn)
        4.3.10 數(shù)據(jù)及圖片處理方法
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 絡(luò)合物最大吸收波長的確定
        4.4.2 多肽線性質(zhì)量濃度范圍的確定
        4.4.3 最適pH的確定
        4.4.4 最適TCA濃度的確定
        4.4.5 最適條件下標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
        4.4.6 精密度試驗(yàn)結(jié)果分析
        4.4.7 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果分析
        4.4.8 魚皮膠原蛋白肽的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果分析
        4.4.9 魚皮膠原蛋白肽與膠原蛋白的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果分析
        4.4.10 不同種類的羅非魚膠原蛋白肽及加羅非魚膠原蛋白的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果分析
    4.5 本章小結(jié)
第五章 膠原蛋白水解酶的純化鑒定、酶學(xué)性質(zhì)及固定化研究
    5.1 引言
    5.2 材料與儀器
        5.2.1 主要材料與試劑
        5.2.2 儀器與設(shè)備
    5.3 實(shí)驗(yàn)方法
        5.3.1 酶的純化及鑒定
        5.3.2 膠原蛋白水解酶酶學(xué)性質(zhì)研究
        5.3.3 磺化聚苯乙烯納米球固定膠原蛋白水解酶及表征
    5.4 結(jié)果與討論
        5.4.1 膠原蛋白水解酶的分離、純化與鑒定
        5.4.2 膠原蛋白水解酶酶學(xué)性質(zhì)研究
        5.4.3 磺化聚苯乙烯(SPS)納米球固定膠原蛋白水解酶及表征
    5.5 本章小節(jié)
第六章 羅非魚皮膠原蛋白酶解過程反應(yīng)行為研究
    6.1 引言
    6.2 材料與儀器
        6.2.1 主要材料與試劑
        6.2.2 主要儀器與設(shè)備
    6.3 實(shí)驗(yàn)方法
        6.3.1 酶解體系的建立
        6.3.2 水解度的測定
        6.3.3 酶解體系物質(zhì)分子量分布的測定
        6.3.4 3-D圖形構(gòu)建與曲面方程擬合及驗(yàn)證
        6.3.5 不同水解度下酶解物的抗氧化能力評價(jià)
        6.3.6 羅非魚皮明膠化膠原蛋白肽的HPLC-MSMS檢測方法及序列分析
        6.3.7 鑒定得到的肽序列結(jié)構(gòu)的模擬
    6.4 結(jié)果與分析
        6.4.1 酶解反應(yīng)動(dòng)態(tài)特征3-D模型構(gòu)建
        6.4.2 羅非魚皮明膠化膠原酶解產(chǎn)物的抗氧化能力評價(jià)
        6.4.3 羅非魚皮明膠化膠原酶解產(chǎn)物肽的序列分析及結(jié)構(gòu)預(yù)測
    6.5 小結(jié)
第七章 羅非魚皮膠原蛋白肽-鈣螯合物的制備及體外Caco-2細(xì)胞模型促鈣吸收評價(jià)
    7.1 引言
    7.2 材料與儀器
        7.2.1 主要材料與試劑
        7.2.2 儀器與設(shè)備
    7.3 實(shí)驗(yàn)方法
        7.3.1 羅非魚皮膠原蛋白肽分子量的測定方法
        7.3.2 羅非魚皮膠原蛋白肽中鈣含量的測定
        7.3.3 羅非魚皮膠原蛋白肽-鈣螯合物基本制備方法
        7.3.4 羅非魚皮膠原蛋白肽-鈣螯合物制備工藝優(yōu)化
        7.3.5 鈣螯合率的測定
        7.3.6 膠原蛋白肽螯合鈣的結(jié)構(gòu)表征
        7.3.7 羅非魚皮膠原蛋白肽鈣螯合物的穩(wěn)定性研究
        7.3.8 羅非魚魚鱗肽鈣螯合物中鈣結(jié)合量的測定方法
    7.4 結(jié)果與討論
        7.4.1 羅非魚皮膠原蛋白肽分子量分布測定結(jié)果
        7.4.2 羅非魚膠原蛋白肽含鈣量的測定結(jié)果
        7.4.3 羅非魚皮膠原蛋白肽鈣螯合物制備工藝單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析
        7.4.4 羅非魚皮膠原蛋白肽鈣螯合物制備工藝響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)結(jié)果及分析
        7.4.5 膠原蛋白肽鈣螯合物結(jié)構(gòu)表征
        7.4.6 羅非魚皮膠原蛋白肽鈣螯合物穩(wěn)定性研究
        7.4.7 羅非魚皮膠原蛋白肽鈣螯合物體外促鈣吸收效果
    7.5 本章小節(jié)
結(jié)論與展望
    一、結(jié)論
    二、主要?jiǎng)?chuàng)新點(diǎn)
    三、展望
參考文獻(xiàn)
攻讀博士學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
附件



本文編號：3752550