蕎麥胰蛋白酶抑制劑（buckwheat trypsin inhibitor,BTI）是胰蛋白酶的一種競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑,可以與胰蛋白酶特異性結(jié)合,從而達(dá)到抑制胰蛋白酶活性的效果。研究表明,BTI對(duì)于臨床新藥物的開發(fā)和抗蟲轉(zhuǎn)基因作物研究有著實(shí)際意義。本課題在已解析了BTI一級(jí)序列及三維結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步研究了BTI的理化性質(zhì),并制備了BTI的突變體,獲得一種新型抑制劑。最后初步研究了BTI在鱸魚保鮮上的應(yīng)用,拓寬了胰蛋白酶抑制劑的應(yīng)用領(lǐng)域。本研究主要內(nèi)容如下:第一部分:通過(guò)比較蕎麥胰蛋白酶抑制劑和大豆胰蛋白酶抑制劑（soybean trypsin inhibitor,SBTI）的抑制活性,并進(jìn)一步測(cè)定了溫度、pH、鹽離子、有機(jī)物等對(duì)兩種抑制劑活性的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:100℃水浴加熱后BTI與SBTI的抑制活性均降低,加熱80 min后,BTI的剩余抑制率為75%,SBTI則全部失活。用pH 2-12緩沖液處理對(duì)BTI與SBTI活性均無(wú)影響。Zn²⁺對(duì)BTI活性有顯著降低作用。當(dāng)濃度為2-10 mM時(shí),Mg²⁺、Cu²⁺、H<... 

【文章頁(yè)數(shù)】：59 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 前言
    1.1 胰蛋白酶抑制劑
    1.2 大豆胰蛋白酶抑制劑
    1.3 蕎麥胰蛋白酶抑制劑
    1.4 定點(diǎn)突變技術(shù)
    1.5 食品中的內(nèi)源酶
    1.6 乳酸鏈球菌素
    1.7 涂膜保鮮技術(shù)
第二章 BTI與SBTI理化性質(zhì)的比較
    2.1 材料與儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 BTI的誘導(dǎo)表達(dá)和純化
        2.2.2 BTI與SBTI抑制活性的測(cè)定
        2.2.3 溫度對(duì)BTI及SBTI抑制活性的影響
        2.2.4 pH對(duì)BTI及SBTI抑制活性的影響
        2.2.5 鹽離子對(duì)BTI及SBTI抑制活性的影響
        2.2.6 有機(jī)物對(duì)BTI及SBTI抑制活性的影響
        2.2.7 其他化合物對(duì)BTI及SBTI抑制活的影響
        2.2.8 抑制劑的動(dòng)力學(xué)分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 BTI與SBTI對(duì)胰蛋白酶的半抑制濃度
        2.3.2 溫度對(duì)BTI與 SBTI抑制活性的影響
        2.3.3 pH對(duì)抑制劑抑制活性的影響
        2.3.4 金屬離子對(duì)抑制劑活性的影響
        2.3.5 有機(jī)物對(duì)抑制劑活性影響結(jié)果
        2.3.6 不同化合物對(duì)抑制劑活性的影響
        2.3.7 抑制劑動(dòng)力學(xué)分析
    2.4 討論
第三章 BTI突變體BCI的制備及理化性質(zhì)研究
    3.1 材料及儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 BCI突變體基因PCR擴(kuò)增
        3.2.2 PCR產(chǎn)物的回收
        3.2.3 重組質(zhì)粒的連接與轉(zhuǎn)化
        3.2.4 BCI的誘導(dǎo)表達(dá)和純化
        3.2.5 BCI抑制活性的測(cè)定
        3.2.6 溫度對(duì)BCI抑制活性影響
        3.2.7 pH對(duì)BCI抑制活性影響
        3.2.8 離子、有機(jī)試劑等對(duì)BCI抑制活性影響
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 PCR產(chǎn)物的回收與測(cè)序
        3.3.2 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳
        3.3.3 BCI抑制活性分析
        3.3.4 溫度對(duì)BCI抑制活性影響分析
        3.3.5 pH對(duì)BCI抑制活性影響分析
        3.3.6 離子、有機(jī)試劑等對(duì)BCI抑制活性影響分析
    3.4 討論
第四章 添加BTI的保鮮涂膜對(duì)鱸魚的保鮮效果
    4.1 材料與儀器
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 保鮮涂膜的制備
        4.2.2 肉樣處理
        4.2.3 菌落總數(shù)的測(cè)定
        4.2.4 揮發(fā)性鹽基氮的測(cè)定
        4.2.5 硫代巴比妥酸的測(cè)定
        4.2.6 pH值的測(cè)定
        4.2.7 蒸煮損失率的測(cè)定
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 菌落總數(shù)的變化分析
        4.3.2 揮發(fā)性鹽基氮的變化分析
        4.3.3 硫代巴比妥酸的變化分析
        4.3.4 pH值變化分析
        4.3.5 蒸煮損失率的變化分析
    4.4 討論
第五章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)介及聯(lián)系方式


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[2]蕎麥胰蛋白酶抑制劑對(duì)雞肉肉糜凝膠特性的影響[D]. 栗安之.山西大學(xué) 2019
[3]兔肉微凍保鮮技術(shù)研究[D]. 蘭洋.西南大學(xué) 2016
[4]明膠基納米復(fù)合材料的制備、表征及其應(yīng)用[D]. 陳廣新.齊魯工業(yè)大學(xué) 2015
[5]乳酸鏈球菌素產(chǎn)生菌株篩選及其抑菌機(jī)理研究[D]. 白澤樸.沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008



本文編號(hào)：3708505