食品安全問題（微生物污染、農(nóng)獸藥殘留和違禁物質(zhì)添加等）嚴重威脅人畜的生命健康,其中由食品中微生物繁殖后產(chǎn)生的真菌毒素誘發(fā)的食源性疾病已廣泛引起大家的關注。目前已分離鑒定出的300多種真菌毒素中有30多種的危害較大,又以黃曲霉毒素B₁（Aflatoxin B₁,AFB₁）、玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEN）和赭曲霉毒素A（Ochratoxin A,OTA）等毒性強、具有“三致”作用的毒素的污染概率最高,主要存在于糧食及其制品中。且一些真菌可同時產(chǎn)生多種毒素,多種毒素混合污染一種糧食的情況也普遍存在。加強檢測技術的研發(fā)是保障糧食質(zhì)量安全的重要手段。熒光免疫層析檢測技術（fluorescent immunochromatographic assay,FICA）具有靈敏、準確、快速、高通量、低成本,有多種熒光標記物可供選擇,能實現(xiàn)多組分的同步檢測等優(yōu)勢。本論文旨在建立熒光免疫層析法檢測糧食中的真菌毒素,為政府監(jiān)管提供參考。首先通過肟化改造AFB₁得到半抗原AFB₁-CMO,... 

【文章頁數(shù)】：111 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 文獻綜述
    1.1 研究目的和意義
    1.2 真菌毒素概述
        1.2.1 黃曲霉毒素B_1
        1.2.2 玉米赤霉烯酮
        1.2.3 赭曲霉毒素A
    1.3 真菌毒素檢測方法
        1.3.1 儀器檢測方法
        1.3.2 免疫學檢測方法
    1.4 熒光免疫層析法
        1.4.1 量子點熒光免疫層析法
        1.4.2 量子點微球熒光免疫層析法
        1.4.3 時間分辨熒光免疫層析法
    1.5 熒光免疫層析法檢測真菌毒素的研究展望
        1.5.1 多種熒光免疫層析法檢測真菌毒素的比較
        1.5.2 真菌毒素混合污染的同時檢測
    1.6 研究內(nèi)容和方法
        1.6.1 黃曲霉毒素B_1單克隆抗體的制備
        1.6.2 糧食中黃曲霉毒素B_1的三種熒光定量免疫層析技術研究
        1.6.3 同時檢測糧食中三種真菌毒素的多重時間分辨熒光定量免疫層析技術研究
第2章 黃曲霉毒素B_1單克隆抗體的制備
    2.1 試驗材料
        2.1.1 試劑
        2.1.2 儀器與設備
        2.1.3 溶液體系
    2.2 試驗方法
        2.2.1 抗原制備
        2.2.2 動物免疫
        2.2.3 抗血清篩選
        2.2.4 黃曲霉毒素B_1單克隆抗體的制備
        2.2.5 抗體純化
        2.2.6 抗體生物素化
        2.2.7 抗體性能鑒定
    2.3 結果與分析
        2.3.1 全抗原鑒定
        2.3.2 抗血清篩選
        2.3.3 單克隆抗體的制備
        2.3.4 抗體的性質(zhì)
    2.4 討論
        2.4.1 人工抗原的合成
        2.4.2 單克隆抗體的制備
        2.4.3 與文獻報道的抗體的比較
    2.5 小結
第3章 糧食中黃曲霉毒素B_1的三種熒光定量免疫層析技術研究
    3.1 試驗材料
        3.1.1 試劑
        3.1.2 耗材
        3.1.3 儀器與設備
        3.1.4 溶液體系
    3.2 試驗方法
        3.2.1 三種熒光標記物性質(zhì)的鑒定
        3.2.2 三種標記抗體熒光探針的制備
        3.2.3 三種熒光定量免疫層析檢測方法的建立
        3.2.4 三種熒光定量免疫層析方法工藝條件的優(yōu)化
        3.2.5 動力學分析
        3.2.6 定量檢測
        3.2.7 實際樣品檢測
    3.3 討論
        3.3.1 三種熒光標記物的電鏡表征分析
        3.3.2 三種熒光定量免疫層析法的原理
        3.3.3 熒光定量免疫層析法工藝條件的優(yōu)化
        3.3.4 動力學分析
        3.3.5 定量檢測
        3.3.6 實際樣品檢測
    3.4 討論
        3.4.1 三種熒光定量免疫層析法的比較
        3.4.2 與國內(nèi)外方法比較
    3.5 小結
第4章 同時檢測糧食中三種真菌毒素的多重時間分辨熒光定量免疫層析技術研究
    4.1 試驗材料
        4.1.1 試劑
        4.1.2 耗材
        4.1.3 儀器與設備
        4.1.4 溶液體系
    4.2 試驗方法
        4.2.1 時間分辨熒光探針的制備
        4.2.2 多重時間分辨熒光定量免疫層析法的建立
        4.2.3 檢測方法優(yōu)化
        4.2.4 動力學分析
        4.2.5 定量檢測
        4.2.6 實際樣品檢測
    4.3 結果與分析
        4.3.1 多重時間分辨熒光定量免疫層析法的原理
        4.3.2 多重時間分辨熒光定量免疫層析法的優(yōu)化
        4.3.3 動力學分析
        4.3.4 定量檢測
        4.3.5 實際樣品檢測
    4.4 討論
        4.4.1 時間分辨熒光微球標記抗體
        4.4.2 與國內(nèi)外方法的比較
    4.5 小結
第5章 結論與展望
    5.1 結論
        5.1.1 黃曲霉毒素B_1單克隆抗體的制備
        5.1.2 糧食中黃曲霉毒素B_1的三種熒光定量免疫層析技術研究
        5.1.3 同時檢測糧食中三種真菌毒素的多重時間分辨熒光定量免疫層析技術研究
    5.2 展望
        5.2.1 熒光探針保存方式的探究
        5.2.2 時間分辨熒光定量免疫層析法優(yōu)勢普適性的探究
參考文獻
致謝
攻讀碩士學位期間發(fā)表論文


【參考文獻】：
期刊論文
[1]檢測黃曲霉毒素的方法及其應用[J]. 劉哲棟,徐暉.  現(xiàn)代食品. 2017(22)
[2]熒光標記免疫層析技術在食品安全檢測中的應用研究進展[J]. 湯軼偉,張宏,崔芷萌,焦雪晴,劉歡,鐘克利,劉秀英,高子媛,徐志祥,丁浩宸,勵建榮.  食品工業(yè)科技. 2018(02)
[3]玉米赤霉烯酮檢測方法的研究進展[J]. 周妍,張圓圓,刁晨曦,陸濤峰,陳洪巖.  中國飼料. 2017(16)
[4]食品黃曲霉毒素總量檢測方法的研究與應用[J]. 王亞楠,王曉斐,王自良.  食品與發(fā)酵工業(yè). 2018(01)
[5]飼料中玉米赤霉烯酮檢測及脫毒技術的研究進展[J]. 葛文霞,柳旭偉,張文舉,劉曉娜.  安徽農(nóng)業(yè)科學. 2016(01)
[6]黃曲霉毒素B1單克隆抗體的制備及間接競爭ELISA檢測技術研究[J]. 謝琿,章先,王歆,凡鵬程,時玉菲,方維煥.  微生物學通報. 2015(10)
[7]基于上轉(zhuǎn)發(fā)光技術的奶粉及牛奶中黃曲霉毒素M1快速定量檢測方法研究[J]. 劉曉,王立平,周蕾,林承喜,楊瑞馥,邱景富.  軍事醫(yī)學. 2014(11)
[8]農(nóng)產(chǎn)品中黃曲霉毒素的時間分辨熒光免疫層析快速檢測技術研究[J]. 張兆威,李培武,張奇,丁小霞.  中國農(nóng)業(yè)科學. 2014(18)
[9]黃曲霉毒素免疫檢測技術研究進展[J]. 張奇,李培武,陳小媚,周海燕,印南日,甘冬生.  農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量與安全. 2013(03)
[10]真菌毒素的污染狀況及毒性研究[J]. 陳志飛,王元凱,嚴亞賢,李樹清,于翠,楊翠云,孫建和.  檢驗檢疫學刊. 2012(05)

博士論文
[1]玉米中四種真菌毒素的免疫分析檢測技術研究[D]. 張西亞.中國農(nóng)業(yè)大學 2017
[2]黃曲霉毒素雜交瘤細胞株的選育及免疫層析檢測技術研究[D]. 張道宏.中國農(nóng)業(yè)科學院 2011

碩士論文
[1]基于核酸適體傳感器的赭曲霉毒素A檢測方法研究[D]. 魯麗媛.河南工業(yè)大學 2017
[2]PEG-載體蛋白中載體蛋白免疫原性對PEG特異性抗體性質(zhì)的影響[D]. 萬雪.天津科技大學 2016
[3]黃曲霉毒素B1單抗的制備及初步應用[D]. 蔣廣明.揚州大學 2007



本文編號：3692454