植物化學(xué)物具有清除活性氧（ROS）的能力,與心血管疾�。–VD）的發(fā)病機(jī)制有著十分緊密的聯(lián)系,人們對植物化學(xué)物的研究有著極大興趣。但是,目前對食物中不同植物化學(xué)物之間的相互作用關(guān)系及其作用機(jī)制的研究較少。番茄紅素（Lycopene,LY）、葉黃素（Lutein,LU）、綠原酸（Chlorogenic acid,CA）和飛燕草素（Delphinidin,DP）是食品中含量豐富且分布廣泛的抗氧化物質(zhì),具有抗氧化、抗炎癥、降低心血管疾病等多種疾病的發(fā)病率等功能。本論文以上述四種天然植物化學(xué)物為研究對象,采用ABTS和DPPH兩種體外化學(xué)實(shí)驗(yàn)方法,分析四種植物化學(xué)物的體外抗氧化相互作用,采用H2O2誘導(dǎo)H9c2大鼠心肌細(xì)胞建立氧化損傷模型,研究四種植物化學(xué)物復(fù)配前后對H9c2大鼠心肌細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用。在此基礎(chǔ)上,研究番茄紅素和葉黃素的細(xì)胞內(nèi)吸收與降解,并基于Nrf2通路分析植物化學(xué)物的抗氧化相互作用機(jī)制,為闡明植物化學(xué)物抗氧化相互作用機(jī)制和開發(fā)相應(yīng)的功能食品提供理論依據(jù)。主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下:1.以不同摩爾比對四種天然植物化學(xué)物（番茄紅素、葉黃素、綠原酸和飛燕草素）進(jìn)行兩兩復(fù)配（1:9... 

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【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 緒論
    1.1 前言
    1.2 植物化學(xué)物的抗氧化活性及功能
        1.2.1 類胡蘿卜素
        1.2.2 酚類化合物
        1.2.3 其他植物化學(xué)物
    1.3 植物化學(xué)物的相互作用
    1.4 抗氧化系統(tǒng)機(jī)制的概述
        1.4.1 通過直接清除自由基發(fā)揮抗氧化作用
        1.4.2 通過激活體內(nèi)固有的抗氧化系統(tǒng)發(fā)揮抗氧化作用
    1.5 課題研究的來源、意義及主要內(nèi)容
        1.5.1 課題來源
        1.5.2 研究價(jià)值及意義
    1.6 創(chuàng)新點(diǎn)
    1.7 主要研究內(nèi)容
第2章 番茄紅素、葉黃素、綠原酸和飛燕草素的體外抗氧化相互作用
    2.1 引言
    2.2 試驗(yàn)材料與設(shè)備
        2.2.1 材料與試劑
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 ABTS自由基清除能力測定
        2.3.2 DPPH自由基清除能力測定
        2.3.3 數(shù)據(jù)處理
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 四種植物化學(xué)物的ABTS自由基清除能力
        2.4.2 ABTS法中四種植物化學(xué)物的抗氧化相互作用關(guān)系
        2.4.3 四種植物化學(xué)物的DPPH自由基清除能力
        2.4.4 DPPH法中四種植物化學(xué)物的抗氧化相互作用關(guān)系
        2.4.5 等輻射分析法評價(jià)天然產(chǎn)物間抗氧化相互作用關(guān)系
    2.5 討論
        2.5.1 等輻射分析法可以快速直觀的判斷植物化學(xué)物的抗氧化相互作用
        2.5.2 兩種物質(zhì)以不同比例混合后抗氧化相互作用可能具有較大差異
        2.5.3 DPPH法和ABTS法測定四種植物化學(xué)物結(jié)果存在差異
    2.6 小結(jié)
第3章 番茄紅素、葉黃素、綠原酸和飛燕草素復(fù)配前后對H9C2細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用
    3.1 引言
    3.2 試驗(yàn)材料與設(shè)備
        3.2.1 材料與試劑
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 H9c2細(xì)胞的培養(yǎng)
        3.3.2 植物化學(xué)物對細(xì)胞的毒性實(shí)驗(yàn)
        3.3.3 CAA法測細(xì)胞抗氧化活性
        3.3.4 細(xì)胞內(nèi)ROS的測定
        3.3.5 抗氧化酶的測定
        3.3.6 數(shù)據(jù)處理
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 植物化學(xué)物對H9c2細(xì)胞的毒性實(shí)驗(yàn)
        3.4.2 四種天然植物化學(xué)物單獨(dú)作用H9c2細(xì)胞的抗氧化保護(hù)作用
        3.4.3 聯(lián)合指數(shù)法篩選顯著抗氧化協(xié)同、拮抗組合
        3.4.4 顯著抗氧化協(xié)同、拮抗組合的ROS水平測定
        3.4.5 顯著抗氧化協(xié)同、拮抗組合的抗氧化酶活性的測定
    3.5 討論
        3.5.1 高濃度的植物化學(xué)物可能在H9c2細(xì)胞產(chǎn)生促氧化作用
        3.5.2 體外化學(xué)與細(xì)胞內(nèi)抗氧化相互作用的差異
        3.5.3 顯著協(xié)同拮抗組在抗氧化酶活性水平上未達(dá)到預(yù)期相互作用效果
    3.6 小結(jié)
第4章 基于NRF2通路研究抗氧化相互作用機(jī)制
    4.1 引言
    4.2 試驗(yàn)材料與設(shè)備
        4.2.1 材料與試劑
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 H9c2細(xì)胞的培養(yǎng)
        4.3.2 Western Blot檢測Nrf2信號通路相關(guān)蛋白的表達(dá)
        4.3.3 免疫熒光染色測定Nrf2進(jìn)入細(xì)胞核
        4.3.4 JC-1染色檢測線粒體膜電位
        4.3.5 數(shù)據(jù)分析
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 H_2O_2作用濃度對細(xì)胞Nrf2通路蛋白的影響
        4.4.2 H_2O_2作用時(shí)間對細(xì)胞Nrf2通路蛋白的影響
        4.4.3 飛燕草素作用時(shí)間對Nrf2通路蛋白的影響
        4.4.4 四種天然植物化學(xué)物復(fù)配前后對GCLC、HO-1蛋白的影響
        4.4.5 四種天然植物化學(xué)物復(fù)配前后Nrf2蛋白入核的影響
        4.4.6 免疫熒光染色測定Nrf2進(jìn)入細(xì)胞核
        4.4.7 Nrf2抑制劑對顯著協(xié)同拮抗組中Nrf2通路蛋白表達(dá)的影響
        4.4.8 JC-1檢測線粒體膜電位變化
    4.5 討論
        4.5.1 Nrf2信號通路是調(diào)控細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激水平的核心通路
        4.5.2 H_2O_2的對H9c2細(xì)胞的作用變化
        4.5.3 四種植物化學(xué)物復(fù)配組合對H9c2細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)機(jī)制
    4.6 小結(jié)
第5章 番茄紅素和葉黃素在H9C2細(xì)胞的降解和吸收
    5.1 引言
    5.2
        5.2.1 材料與試劑
        5.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    5.3 實(shí)驗(yàn)方法
        5.3.1 番茄紅素和葉黃素在DMEM培養(yǎng)基中的降解
        5.3.2 番茄紅素含量的測定
        5.3.3 葉黃素含量的測定
        5.3.4 H9c2細(xì)胞中類胡蘿卜素的提取
        5.3.5 數(shù)據(jù)分析
    5.4 結(jié)果與分析
        5.4.1 番茄紅素在DMEM培養(yǎng)基中的降解
        5.4.2 不同比例、不同濃度復(fù)配前后對番茄紅素細(xì)胞吸收的影響
        5.4.3 葉黃素在DMEM培養(yǎng)基中的降解
        5.4.4 不同比例、不同濃度復(fù)配前后對葉黃素細(xì)胞吸收的影響
    5.5 討論
        5.5.1 植物化學(xué)物的吸收和代謝機(jī)制
        5.5.2 植物化學(xué)物的吸收與抗氧化相互作用的關(guān)系
        5.5.3 類胡蘿卜素在DMEM培養(yǎng)基中的穩(wěn)定性與細(xì)胞吸收的關(guān)系
    5.6 小結(jié)
第6章 結(jié)論與展望
    6.1 結(jié)論
        6.1.1 番茄紅素、葉黃素、綠原酸和飛燕草素體外抗氧化相互作用
        6.1.2 番茄紅素、葉黃素、綠原酸和飛燕草素復(fù)配前后對H9c2細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用
        6.1.3 基于Nrf2通路研究四種植物化學(xué)物相互作用的機(jī)理
        6.1.4 番茄紅素和葉黃素在H9c2細(xì)胞的降解和吸收
    6.2 進(jìn)一步工作方向
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果


【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號：3687537