魚(yú)卵中含有豐富的卵黃蛋白,主要由卵黃脂磷蛋白（Lv）、卵黃高磷蛋白（Pv）和β’-組分（β’-c）組成,均屬于糖蛋白。研究發(fā)現(xiàn),魚(yú)類(lèi)魚(yú)卵中主要的過(guò)敏原為β’-c糖蛋白,世界衛(wèi)生組織和國(guó)際免疫學(xué)聯(lián)合會(huì)的官方過(guò)敏原清單中把其命名為“Onc k 5”。迄今為止,與其他食物過(guò)敏原相比,魚(yú)卵中過(guò)敏原β’-c的結(jié)構(gòu)方面的信息較少,對(duì)于不同魚(yú)種魚(yú)卵的致敏原因也缺乏系統(tǒng)性地研究。本課題采用施氏鱘魚(yú)卵作為研究對(duì)象,著重研究鱘魚(yú)卵中β’-c糖蛋白結(jié)構(gòu)表征、探究不同物種間過(guò)敏蛋白的交叉反應(yīng)性,并從生物信息學(xué)方面驗(yàn)證其免疫相關(guān)性。主要研究結(jié)果如下:1.對(duì)分離純化后得到鱘魚(yú)卵β’-c蛋白進(jìn)行多糖和蛋白含量的測(cè)定,多糖含量為4.87%,蛋白含量為33.2%。采用PNGase F酶釋放糖蛋白中的N-糖鏈,經(jīng)完全甲基化處理后,通過(guò)離子肼質(zhì)譜儀共鑒定出7種N-糖鏈,包括3種高甘露糖型（Hex3HexNAc2、Hex4HexNAc2、Hex5HexNAc2）、4 種復(fù)雜型（Hex3HexNAc3、Hex3HexNAc4、Hex3HexNAc5、Hex3HexNAc6）,采用HILIC-ion trap-MSn對(duì)胰蛋白酶酶... 

【文章來(lái)源】：浙江工商大學(xué)浙江省

【文章頁(yè)數(shù)】：84 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．２葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)??

－Ｃ蛋白粉末配成３?ｍｇ／ｍＬ的溶液，經(jīng)ＢＣＡ蛋白測(cè)定發(fā)現(xiàn)Ｐ’－Ｃ多糖含量為０．９９７??ｍｇ／ｍＬ，故ｐ，－ｃ糖蛋中多糖含量溝４．８７?％。??０．７?－Ｉ??０．６?■?ｙ?＝?０．０１４１Ｘ?＋?０．０１０５??０．５－?Ｒ２?＝?０．９９３８??Ｅ?？？？？??ｓ?０４．??穿?０．３?－??＜?？，？？？??０．２?－??〇．１?．??０?ｍ?１?１?１?１?１??０?１０?２０?３０?４０?５０??葡萄糖濃度（ｕｇ／ｍＬ?）??圖２．２葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)??Ｆｉｇ．２．２?Ｓｔａｎｄａｒｄ?ｃｕｒｖｅ?ｏｆ?ｇｌｕｃｏｓｅ??ＢＣＡ測(cè)蛋白含量標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，如圖２．３所示。標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)以蛋白濃度（ｍｇ／ｍＬ）為橫坐標(biāo)，??蛋＆溶液在５６２?ｎｍ處的吸光值為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程為Ｙ＝１．０１０８Ｘ－０．１２９８，Ｒ２＞０．９９，??表明其線(xiàn)性效果良好，可用其測(cè)樣品中蛋白濃度。將凍爭(zhēng)的Ｐ’－ｃ蛋白粉末配成３?ｍｇ／ｍＬ??的．溶液：，經(jīng)ＢＣＡ蛋斑測(cè)定發(fā)現(xiàn)ｐ’－ｃ蛋．白含慧為０．９９７?ｍｇ／ｍＬ，故ｐ’－ｃ糖蛋肯中可洛性??蛋白含量為３３．２％。??０．７?－Ｉ??０．６?■?？？？？？??＿?０．５?■??＾?°＇４?■?ｙ?＝?１．０１０８Ｘ?＋?０．?１２９８??￥?０．３?■???？?Ｒ２?＝?０．?９９２２??＾０．２－??？?？？？??０１?〇??〇?０?０．１?０．２?０．３?０．４?０．５?０．６??蛋白質(zhì)濃度（ｍｇ／ｍＬ）??圖２．３?ＢＣＡ蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)??Ｆｉｇ．２．３?Ｓｔａｎｄａｒｄ?ｃｕｒｖｅ?ｏｆ?ＢＣＡ?ｐｒｏｔｅｉｎ??２．４．

施氏轉(zhuǎn)魚(yú)鄭Ｐ＿－Ｃ糖輋白猶結(jié)構(gòu)表征與免疫突叉戾應(yīng)相角研究??ｓ５ｅ＂?＇?＂＊５ｅ＂?＇?＂？ｉｓ?＇?ｔｉｓ＂?＇?ｔｉｅ＂?＇?Ｖｓｅ?＂ｊａｅ＇?Ｖ＊?＇?＇？？＇？＂?＇?＂？？？＂?＇?ｓｘ?＇?ｔｉｘ?＇?ｔ＊ｓｓ?＂?ｍ＇ｓｓ?＂?ｘ＊?＇?＂ａ＇ｘ＂?＂＊？＂＊?＇?＞？＇ｏｅ?＇?ｉｉｅｓ＇?＇?＜Ｗ?＇?＜ｘ?＇?＇＜？＊＂?＇?Ｖ？＇ｘ＇?＊＇？?＇?？＊＇＊＇?＇?＂？＊ｓｓ??？？??圖２．１２?ＨＩＬＩＣ分離ｐ’－ｃ糖蛋白胰蛋白酶酶解產(chǎn)物：紫外檢測(cè)液相色譜圖??Ｆｉｇ．?２．１２?Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｐ？－ｃ?ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ?ｔｒｙｐｔｉｃ?ｄｉｇｅｓｔ?ｉｎ?ＨＩＬＩＣ?ｗｉｔｈ?ＵＶ?２８０?ｎｍ??圖２．１２為ＨＩＬＩＣ對(duì)酶解產(chǎn)物糖肽的分離圖，如圖知糖肽中的多種肽分離效果較好，??麗得到的離子峰信號(hào)値較高，糖基化的肽和非糖基化的肽清晰的分離，肽段在經(jīng)過(guò)糖基??化后，親水性加強(qiáng)，所以在色譜柱上的保留時(shí)間變長(zhǎng)，相比較于非糖基化的肽更難洗脫，??因此，糖肽均在非糖基化肽后得到分離［７９］。通過(guò)對(duì)糖肽中糖鏈碎片離子的分析，自樣品??中肽段洗脫完后＊糖肽開(kāi)始進(jìn)行洗脫，且后面的峰均為糖基化后的肽段，根據(jù)肽段的大??孝肽段中氨基酸的極性大孝糖鏈的大小及結(jié)構(gòu)組成在色譜柱上進(jìn)行洗脫分離。??糖肽經(jīng)ＨＩＬＩＣ－ｉｏｎｔｒａｐ－ＭＳ１１分析并且采用多級(jí)質(zhì)譜ＭＳ２和ＭＳ３碎裂模式采集。質(zhì)譜??獲得的ＭＳ／ＭＳ數(shù)據(jù)用于篩選糖肽的出現(xiàn)，糖肽的篩選是通過(guò)觀(guān)察ＭＳ２提取離子流圖中是??否會(huì)出現(xiàn)糖鏈的特征碎片，即一系列氧鑰離子如５２８?（ＨｅｘＮＡｃ＋２Ｈｅｘ＋Ｈ）＋、ｗ．４?５６９

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：3595397